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Optimiser la constitution génétique de produit chimique sondes dans RCPG pour Photo-réticulation cartographie et de la chimie de Bioorthogonal dans les cellules de mammifères vivants
JoVE 신문
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JoVE 신문 화학
Optimizing the Genetic Incorporation of Chemical Probes into GPCRs for Photo-crosslinking Mapping and Bioorthogonal Chemistry in Live Mammalian Cells
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Optimiser la constitution génétique de produit chimique sondes dans RCPG pour Photo-réticulation cartographie et de la chimie de Bioorthogonal dans les cellules de mammifères vivants

DOI:
10.3791/57069-v

•

14:02 min

•

April 09, 2018

•

, , ,
1Institute of Biochemistry, Faculty of Life Sciences,University of Leipzig

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:11Fluorescence-based Screening of Incorporation Efficiencies
  • 04:22Genetic Incorporation of ncAAs into GPCRs
  • 08:21Ultrafast Bioorthogonal Labeling of GPCRs on Live Mammalian Cells
  • 11:11Results: Incorporation of Chemical Probes into GPCRs in Mammalian Cells for Cross-linking and Imaging Studies
  • 12:52Conclusion

Summary

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Un test facile de fluorescence est présenté afin d’évaluer l’efficacité des paires d’amino-acyl-ARNt-synthétase/ARNt intégrant les amino-acides non canoniques (ANAC) protéines exprimées dans des cellules de mammifères. L’application de l’ANAC à étudier G-récepteurs couplés aux protéines (RCPG) est décrite, y compris la cartographie photo-réticulation de liaison de sites et bioorthogonal GPCR étiquettes apposées sur des cellules vivantes.

Tags

GPCRPhoto-crosslinkingBioorthogonal ChemistryNon-canonical Amino AcidsAmber Codon SuppressionFluorescence AssayMammalian CellsProtein-protein InteractionsLigand BindingLive Cell Imaging

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