CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

Weijun Feng; Lena Herbst; Peter Lichter; Stefan M. Pfister; Hai-Kun Liu; Daisuke Kawauchi

doi:10.3791/57311

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CRISPR induite par la perte de fonction dans cervelet granules des cellules utilisant In Utero électroporation basée sur un transfert de gènes

JoVE 신문
발생학

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CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

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CRISPR induite par la perte de fonction dans cervelet granules des cellules utilisant In Utero électroporation basée sur un transfert de gènes

DOI:

10.3791/57311-v

•

09:39 min

•

June 09, 2018

•

Weijun Feng*¹, Lena Herbst*², Peter Lichter, Stefan M. Pfister^4,5, Hai-Kun Liu, Daisuke Kawauchi⁴

¹Division of Molecular Neurogenetics,German Cancer Research Center (DKFZ), DKFZ-ZMBH Alliance, ²Division of Molecular Genetics,German Cancer Research Center (DKFZ), and German Cancer Consortium (DKTK), ³Hopp-Children’s Cancer Center at the NCT Heidelberg (KiTZ), ⁴Division of Pediatric Neurooncology,German Cancer Research Center (DKFZ), and German Cancer Consortium (DKTK), ⁵Department of Pediatric Hematology and Oncology,Heidelberg University Hospital

Chapters

00:04Title
01:30In Utero Electroporation
05:16Preparation of Cryosections from Electroporated Cerebella
06:22Immunostaining the Cerebellar Cryosections
07:38Results: Immunostained Cerebella from Rosa26-CAG-LSL-Cas9-P2A-EGFP Mouse
08:48Conclusion

Summary

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Études classiques de perte de la fonction des gènes à l’aide d’animaux knock-out ont souvent été coûteux et long. Axée sur l’électroporation de mutagenèse induite par CRISPR somatique est un outil puissant pour comprendre les fonctions de gènes in vivo. Nous rapportons ici une méthode pour analyser les phénotypes d’élimination directe dans les cellules en prolifération du cervelet.

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