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Chapters
- 00:04Title
- 00:41Cell Culturing
- 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
- 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
- 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
- 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
- 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
- 08:52Conclusion
Le protocole décrit ici est basé sur la quantification de Génome-large d’ARNm nouvellement synthétisées purifiée à partir de cellules de levure marquées avec 4-thio-uracile. Cette méthode permet de mesurer la synthèse d’ARNm dételée de désintégration de l’ARNm et, par conséquent, donne une mesure précise de la transcription de l’ARN polymérase II.
