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Wie Protein zu stabilisieren: Stabilität-Bildschirme für thermische Verschiebung Assays und Nano-Differential Scanning Fluorimetry in den Virus-X-Projekt
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
How to Stabilize Protein: Stability Screens for Thermal Shift Assays and Nano Differential Scanning Fluorimetry in the Virus-X Project
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Wie Protein zu stabilisieren: Stabilität-Bildschirme für thermische Verschiebung Assays und Nano-Differential Scanning Fluorimetry in den Virus-X-Projekt

DOI:
10.3791/58666-v

•

07:22 min

•

February 11, 2019

•

, , ,
1Department of Biosciences,Durham University, 2Department of Chemistry,Durham University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:27Preparation of Protein Sample
  • 01:31Performing a Thermal Shift Assay (TSA) Experiment
  • 03:22Preparing and Programing a Nano Differential Scanning Fluorimetry (nanoDSF) Experiment
  • 05:35Results: Analysis of the Temperature at the Inflection Point of the Unfolding Transition (Tm) in Lysozyme
  • 06:55Conclusion

Summary

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Ein Protokoll wird präsentiert, um schnell die thermische Stabilität von Proteinen in einer Vielzahl von Bedingungen durch thermische Verschiebung Assays und Nano differential scanning Fluorimetry testen. Puffersysteme, Salze und Zusatzstoffe, zusammen sind bestehend aus drei einzigartige Stabilität Bildschirme mit Proteinen zu identifizieren geeignete Puffer für funktionelle und strukturelle Studien untersucht.

Tags

Keywords: Protein StabilizationThermal Shift AssayNano Differential Scanning FluorimetryProtein ChemistryDrug DiscoveryStability ScreenProtein ThermostabilityProtein Ligand BindingHigh-throughputSYPRO Orange DyeRT-PCR SystemMelt Curve Analysis

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