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Comment faire pour stabiliser les protéines : écrans de stabilité thermique décaler dosages et Nano différentielle Fluorimétrie dans le projet Virus-X à balayage
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
How to Stabilize Protein: Stability Screens for Thermal Shift Assays and Nano Differential Scanning Fluorimetry in the Virus-X Project
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Comment faire pour stabiliser les protéines : écrans de stabilité thermique décaler dosages et Nano différentielle Fluorimétrie dans le projet Virus-X à balayage

DOI:
10.3791/58666-v

•

07:22 min

•

February 11, 2019

•

, , ,
1Department of Biosciences,Durham University, 2Department of Chemistry,Durham University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:27Preparation of Protein Sample
  • 01:31Performing a Thermal Shift Assay (TSA) Experiment
  • 03:22Preparing and Programing a Nano Differential Scanning Fluorimetry (nanoDSF) Experiment
  • 05:35Results: Analysis of the Temperature at the Inflection Point of the Unfolding Transition (Tm) in Lysozyme
  • 06:55Conclusion

Summary

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Un protocole est présenté pour tester rapidement la stabilité thermique des protéines dans une variété de conditions par décalage thermique et nano différentielle à balayage fluorimétrie. Systèmes tampon, de sels et d’additifs, ensemble comprenant trois écrans de stabilité unique, sont dosés avec des protéines afin d’identifier des tampons adaptés pour des études fonctionnelles et structurelles.

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Keywords: Protein StabilizationThermal Shift AssayNano Differential Scanning FluorimetryProtein ChemistryDrug DiscoveryStability ScreenProtein ThermostabilityProtein Ligand BindingHigh-throughputSYPRO Orange DyeRT-PCR SystemMelt Curve Analysis

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