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Como estabilizar a proteína: telas de estabilidade Thermal turnos, ensaios e Nano diferencial digitalização fluorimétrico no projeto vírus-X
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
How to Stabilize Protein: Stability Screens for Thermal Shift Assays and Nano Differential Scanning Fluorimetry in the Virus-X Project

Como estabilizar a proteína: telas de estabilidade Thermal turnos, ensaios e Nano diferencial digitalização fluorimétrico no projeto vírus-X

DOI:
10.3791/58666-v

•

07:22 min

•

February 11, 2019

•

, , ,
1Department of Biosciences,Durham University, 2Department of Chemistry,Durham University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:27Preparation of Protein Sample
  • 01:31Performing a Thermal Shift Assay (TSA) Experiment
  • 03:22Preparing and Programing a Nano Differential Scanning Fluorimetry (nanoDSF) Experiment
  • 05:35Results: Analysis of the Temperature at the Inflection Point of the Unfolding Transition (Tm) in Lysozyme
  • 06:55Conclusion

Summary

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Um protocolo é apresentado para rapidamente testar a estabilidade térmica das proteínas em uma variedade de condições através de ensaios de mudança térmica e nano diferencial de varredura fluorimétrico. Sistemas tampão, sais e aditivos, juntos composto por três telas de estabilidade única, são doseados com proteínas para identificar buffers adequados para estudos funcionais e estruturais.

Tags

Keywords: Protein StabilizationThermal Shift AssayNano Differential Scanning FluorimetryProtein ChemistryDrug DiscoveryStability ScreenProtein ThermostabilityProtein Ligand BindingHigh-throughputSYPRO Orange DyeRT-PCR SystemMelt Curve Analysis

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