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Profilazione cellulare ad alto rendimento di composti di degradazione proteica mirati utilizzando linee cellulari HiBiT CRISPR
JoVE 신문
암 연구학
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JoVE 신문 암 연구학
High-Throughput Cellular Profiling of Targeted Protein Degradation Compounds Using HiBiT CRISPR Cell Lines
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Profilazione cellulare ad alto rendimento di composti di degradazione proteica mirati utilizzando linee cellulari HiBiT CRISPR

DOI:
10.3791/61787-v

•

05:33 min

•

November 09, 2020

•

, , ,
1Promega Corporation

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:50Endpoint Degradation Studies with HiBiT CRISPR Target Proteins in Lytic Format with Optional Cell Viability Fluorescence Analysis
  • 03:07Results: Degradation Compound Analysis in a HiBiT CRISPR Cell Line
  • 04:51Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive la rilevazione luminescente quantitativa della cinetica di degradazione delle proteine in cellule viventi che sono state ingegnerizzate utilizzando CRISPR / Cas9 per esprimere il tag di rilevamento delle proteine endogene prive di anticorpi fuso a una proteina bersaglio. Sono incluse istruzioni dettagliate per calcolare e ottenere parametri quantitativi di degradazione, velocità, Dmax, DC 50 e Dmax50.

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Keywords: High-throughputCellular ProfilingProtein DegradationHiBiTCRISPR Cell LinesDegradation MonitoringQuantitativeHTS ProfilingDegrader CompoundsEndogenous Target ModulationLytic DetectionLuminescenceCell ViabilityFluorescence

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