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In vitro Caracterización de chaperonas de histonas mediante ensayos analíticos, pull-down y acompañantes
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In Vitro Characterization of Histone Chaperones using Analytical, Pull-Down and Chaperoning Assays
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In vitro Caracterización de chaperonas de histonas mediante ensayos analíticos, pull-down y acompañantes

DOI:
10.3791/63218-v

•

08:16 min

•

December 29, 2021

•

, , , , , , , , ,
1Institute of Life Sciences, 2Regional Centre for Biotechnology, 3School of Biotechnology,KIIT University, 4Department of Molecular Biophysics and Biochemistry,Yale University, 5Department of Pharmacology,University of Vermont College of Medicine

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:04Competitive Pull-Down Assay
  • 02:06Analytical Ultracentrifugation-Sedimentation Velocity (AUC-SV) Experiments
  • 04:29Plasmid Supercoiling Assay to Confirm Histone Chaperoning Function
  • 06:11Results: Characterization of Histone Chaperones Using Analytical, Pull-Down, and Chaperoning Assays
  • 07:41Conclusion

Summary

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Este protocolo describe una batería de métodos que incluye cromatografía analítica de exclusión de tamaño para estudiar la oligomerización y estabilidad de la chaperona de histonas, ensayo de extracción hacia abajo para desentrañar las interacciones chaperona-histona de histonas, AUC para analizar la estequiometría de los complejos de proteínas y ensayo de acompañamiento de histonas para caracterizar funcionalmente una chaperona de histonas putativa in vitro.

Tags

Keywords: Histone ChaperonesPull-down AssaysAnalytical Size Exclusion ChromatographyAnalytical Ultra-centrifugationHistone Chaperoning AssayChromatin ResearchH2A/H2B DimerH3/H4 TetramerSDS-PAGECoomassie Brilliant Blue R250Dialysis BufferAnalytical Ultra Centrifuge

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