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Imaging a singola molecola della mobilità laterale e dell'attività dei canali ionici in doppi strati lipidici mediante microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRF)
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Single-Molecule Imaging of Lateral Mobility and Ion Channel Activity in Lipid Bilayers using Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) Microscopy
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Imaging a singola molecola della mobilità laterale e dell'attività dei canali ionici in doppi strati lipidici mediante microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRF)

DOI:
10.3791/64970-v

•

08:55 min

•

February 17, 2023

•

,
1Biophysics Department, Institute of Biomaterials and Biomolecular Systems,University of Stuttgart

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43Preparation of Lipids and Agarose Hydrogel
  • 01:33PMMA Chamber Assembly and Lipid Monolayer Formation
  • 03:06Preparation of Lipid-Coated Aqueous Droplets in Hexadecane/Silicone Oil Solution
  • 04:17Preparation and Imaging of Single Ion Channels in DIB Membranes
  • 06:49Results: Isolation of TOM-CC and Correlation of Channel Activity with Lateral Mobility of TOM-CC
  • 08:18Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive come utilizzare la microscopia TIRF per tracciare i singoli canali ionici e determinare la loro attività nelle membrane lipidiche supportate, definendo così l'interazione tra il movimento laterale della membrana e la funzione del canale. Descrive come preparare le membrane, registrare i dati e analizzare i risultati.

Tags

Single-molecule ImagingLateral MobilityIon Channel ActivityLipid BilayersTotal Internal Reflection Fluorescence (TIRF) MicroscopyMembrane ProteinsDPhPCHexadecaneSilicone OilAgarose HydrogelPMMA Chamber

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