التصوير الكالسيوم من الخلايا العصبية باستخدام Fura القشرية ، 02:00
Summary
إشارات الكالسيوم يلعب دورا رئيسيا في العديد من العمليات الخلوية بما في ذلك بقاء الجينات والتعبير والتمايز. نحن هنا لشرح كيفية القيام به Fura التصوير الكالسيوم ، 02:00. التصوير الكالسيوم هو أداة قيمة لدراسة تنظيم الكالسيوم داخل الخلايا في الوقت الحقيقي ولائحته التعاقب الإشارة.
Abstract
التصوير الكالسيوم هو تقنية مشتركة يمكن أن يكون مفيدا لقياس اشارات الكالسيوم في الخلايا المستزرعة. تقنيات التصوير الكالسيوم الاستفادة من الأصباغ مؤشر الكالسيوم ، والتي مقرها BAPTA الجزيئات العضوية التي تغير خصائصها الطيفية ردا على ربط أيونات + CA2. الأصباغ مؤشر الكالسيوم في فئتين ، ونسبة – متري الأصباغ مثل Fura – 2 – 1 والهندية وحيدة الطول الموجي مثل الأصباغ Fluo – 4. نسبة الأصباغ ، إما تغيير متري من الإثارة أو أطياف من الانبعاثات ردا على الكالسيوم ، مما يسمح تحديد تركيز الكالسيوم داخل الخلايا من نسبة انبعاث مضان أو الإثارة في موجات مختلفة. والميزة الرئيسية لاستخدام نسبة – متري الأصباغ خلال تحقيقات الطول الموجي واحد هو أن نسبة إشارة مستقلة للتركيز الأصباغ ، وشدة الإضاءة ، والبصرية طول مسار السماح تحديد تركيز الكالسيوم داخل الخلايا بشكل مستقل من هذه التحف. أحد المؤشرات الأكثر شيوعا هو الكالسيوم Fura – 2 ، التي لديها ذروة الانبعاثات في 505 نانومتر ، والتغييرات الإثارة ذروتها من 340 نانومتر إلى 380 نانومتر ردا على الكالسيوم ملزمة. نحن هنا وصف استخدام Fura – 2 لقياس الارتفاعات الكالسيوم في الخلايا العصبية والخلايا الأخرى منفعل.
Protocol
Discussion
في هذا العرض لقد مررنا كافة الخطوات لتنفيذ التصوير باستخدام الكالسيوم Fura – 2 AM. استخدمنا العصبونات القشرية كنموذج ولكن يمكن استخدامها لقياس التصوير الكالسيوم الكالسيوم داخل الخلايا في الوقت الحقيقي في مجموعة متنوعة من الخلايا. عندما تفعل هذا الإجراء المهم لاستخدام الزجاج بدلا …
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| New Item | Fura-2 AM | Invitrogen | F1221 | Protect from light |
| New Item | DMSO | EM Science | MX1457-6 | Keep in dry place to prevent hydration |
| New Item | Albumin from bovine serum | Sigma | A8022-100G | Store at 4° |
| New Item | Imaging Chamber | Warner Instruments | Model RC-20H | |
| New Item | Microscope | Nikon | Eclipse TE2000-U | |
| New Item | Potassium chloride | SIGMA | P9333-500G | |
| New Item | Calibration Kit | Molecular Probes | F6774 | Protect from light |
Referências
- Grynkiewicz, . A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985).
- Lewis, . Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells. Cell Regul. 1, 99-112 (1989).
- Dolmetsch, . Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes. J Gen Physiol. 103, 365-388 (1994).
