Microinjection של ביציות Xenopus Laevis
Summary
כאן אנו מדגימים microinjection cytoplasmic של<em> Xenopus laevis</em> ביציות עם מצע לייבא גרעיני, כמו גם הכנה של ביציות מוזרק להדמיה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים חתך דק.
Abstract
Microinjection של ביציות Xenopus laevis ואחריו במיקרוסקופ אלקטרונים חתך דק (EM) היא מערכת מצוינת לחקר התחבורה nucleocytoplasmic. בגלל גרעין גדול שלה צפיפות גבוהה של קומפלקסים נקבוביות הגרעין (NPCs), תחבורה גרעיני ניתן דמיינו בקלות הביצית Xenopus. תובנה הרבה לתוך המנגנונים של ייבוא, ייצוא גרעיני כבר צבר באמצעות השימוש במערכת זו (נבדקה על ידי Panté, 2006). בנוסף, השתמשנו microinjection של ביציות Xenopus לנתח את המסלולים לייבא גרעיני של וירוסים מספר לשכפל בגרעין המארח.
כאן אנו מדגימים את microinjection cytoplasmic של ביציות Xenopus עם מצע לייבא גרעיני. אנחנו גם מראים הכנה של ביציות מוזרק להדמיה על ידי חתך דק EM, כולל לנתיחה, התייבשות, והטבעה של ביציות לתוך שרף אפוקסי הטבעה. לבסוף, אנו מספקים תוצאות נציג עבור ביציות, כי כבר microinjected עם capsid של nucleopolyhedrovirus baculovirus californica Autographa (AcMNPV) או דקה parvovirus וירוס של עכברים (MVM), ולדון יישומים פוטנציאליים של הטכניקה.
Protocol
Discussion
Microinjection של ביציות Xenopus בשילוב עם חתך דק EM הוא כלי יעיל לחקר התחבורה nucleocytoplasmic. מערכת זו נעשה שימוש כדי למפות שלבים ברורים של יבוא דרך NPC, עבור אינטראקציה דוגמה מצע לייבא גרעיני עם רכיבים מבניים של ה NPC כמו חוטים cytoplasmic וסל גרעיני (נבדקה על ידי Panté, 2006). הוא שימש גם כדי …
Acknowledgements
אנו מודים דוד Theilmann (פסיפיק Agri-Food Research Centre, Summerland, קולומביה הבריטית) למתן AcMNPV baculovirus ו לדיון מועיל.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מקרן קנדה עבור חדשנות (CFI), המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR), מייקל סמית הקרן לבריאות מחקר (MSFHR), ואת למדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה (NSERC) .
Referências
- Panté, N. Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies. Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).
- Panté, N., Kann, M. Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm. Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).
- Rabe, B., Vlachou, A., Panté, N., Helenius, N., Kann, M. Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).
- Cohen, S., Panté, N. Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope. J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).
- Panté, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy. RNA. 3, 498-513 (1997).
