Xenopus laevis Oosit, Mikroenjeksiyon
Summary
İşte biz sitoplazmik mikroenjeksiyon göstermektedir<em> Xenopus laevis</em> Bir nükleer ithalat substrat yanı sıra görünüm için ince kesit elektron mikroskobu ile enjekte edilen oosit hazırlanması oosit.
Abstract
Ince kesit, elektron mikroskobu (EM) tarafından takip Xenopus laevis oositlerin Mikroenjeksiyon Nükleositoplazmik taşıma eğitimi için mükemmel bir sistem. Çünkü, büyük bir çekirdek ve yüksek yoğunluklu nükleer gözenek kompleksler (NPC), nükleer taşıma Xenopus oosit kolayca görüntülenebilmekte . Nükleer ithalat ve ihracat mekanizmalarına daha fazla fikir, bu sistemin kullanımı (Panté 2006) ile elde edilmiştir. Buna ek olarak, çeşitli virüslerin konak çekirdeğinde çoğaltmak nükleer ithalat yolları incelemek Xenopus oositler mikroenjeksiyon kullandık.
Burada bir nükleer ithalat substrat Xenopus oositlerin sitoplazmik mikroenjeksiyon göstermektedir. Ayrıca görünüm için enjekte oosit hazırlanması ince kesit diseksiyonu, dehidratasyon, ve oosit, epoksi gömme reçine içine yerleştirilmesi de dahil olmak üzere, EM. Son olarak, bakülovirüs Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) ya da Fare (MVM) parvovirus Dakika Virüs kapsid microinjected ve tekniğinin potansiyel uygulamaları tartışmak oosit temsilcisi sonuçlar sağlar .
Protocol
Discussion
Mikroenjeksiyon ince kesit EM ile birlikte Xenopus oositleri Nükleositoplazmik taşıma çalışmak için son derece etkili bir araçtır . Bu sistem, sitoplazmik filamentler ve nükleer sepeti (Panté 2006) gibi NPC yapısal bileşenleri ile bir nükleer ithalat substrat örnek etkileşim için ithalat farklı adımlar, NPC ile eşleştirmek için kullanılır olmuştur. Aynı zamanda nükleer kopyalayan virüs nükleer ithalat (; Rabe ve ark, 2003; Cohen ve Panté, 2005 Panté ve Kann, 2002) çalı?…
Acknowledgements
David Theilmann (Pasifik Agri-Gıda Araştırma Merkezi, Summerland, British Columbia) bakülovirüs AcMNPV sağlamak ve yararlı bir tartışma için teşekkür ederiz.
Bu çalışma, Kanada Yenilik Vakfı (CFI), Kanada Sağlık Araştırmaları (CIHR), Michael Smith Sağlık Araştırması (MSFHR) Vakfı Enstitüleri ve Doğa Bilimleri Fakültesi ve Kanada'nın Mühendislik Araştırma Kurumu (NSERC) hibe tarafından desteklenen .
Referências
- Panté, N. Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies. Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).
- Panté, N., Kann, M. Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm. Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).
- Rabe, B., Vlachou, A., Panté, N., Helenius, N., Kann, M. Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).
- Cohen, S., Panté, N. Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope. J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).
- Panté, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy. RNA. 3, 498-513 (1997).
