Dissection של Saccharomyces cerevisiae Asci

Summary

המיקרומניפולציה בתאי שמרים דרוש ניתוח גנטי meiotic או לבחור zygotes דיפלואידי. Micromanipulations אלה מתבצעות באמצעות microneedle של מיקרוסקופ לנתיחה. Microneedle משמש להעביר תאים נשלטת על ידי micromanipulator אשר זמינים עם דרגות שונות של אוטומציה.

Abstract

שמרים היא מערכת מודל ממושמע מאוד המשמש מחקר רבים בתהליכים תאיים שונים. המתח מעבדה משותפת<em> Saccharomyces cerevisiae</em> קיים הפלואידים או מצב דיפלואידי. היכולת לשלב שני אללים haploids ואת היכולת להנהיג שינויים בגנום מחייבת ייצור של asci לנתיחה. ייצור Asci מתאי הפלואידים מתחיל החיזור של שני זני שמרים הפלואידים עם סוגים ההזדווגות תואם לייצר זן דיפלואידי. ניתן להשיג זאת במספר דרכים או על מדיום מוצק או נוזלי. זהו יתרון לבחור עבור diploids במדיום זה סלקטיבי מקדם צמיחה שלהם לעומת כל אחד הזנים הפלואידים. Diploids מותר אז sporulate על מדיום תזונתי דל להקים asci, חבילה של ארבעה תאים הפלואידים בת הנובע רבייה meiotic של דיפלואידי. תערובת של התאים הצמחיים, asci מטופל אז עם zymolyase את האנזים לעכל משם את שק קרום המקיף את ascospores של asci. שימוש המיקרומניפולציה עם microneedle תחת מיקרוסקופ לנתיחה אחד יכול להרים asci הפרט נפרד להעביר את ארבעת ascopores. Asci גזור גדלים במשך כמה ימים נבדקו סמנים או אללים של עניין על ידי ציפוי העתק על גבי מדיה סלקטיבית המתאימה.

Protocol

בנייה של זנים דיפלואידי פרוטוקול לייצור diploids ידי הזדווגות זנים הראשוני צריך להיות הכה על YPD בינוני, או סלקטיבי במידת הצורך, כדי לייצר מושבות אחת. שני זנים הפלואידים צריך להיות סוג של הזדווגות ההפוך (כלומר, מאטה ו MAT?…

Discussion

דיסקציה שמרים הוא כלי שימושי כדי לבחור זנים חדשים עם סמנים הרצוי. בעת קביעת דפוס הצמיחה התיאורטי של ארבעה ascospores חשוב להסתכל גנוטיפ של התא הווגטטיבי. אם הפלסמיד הוא ההווה, צריך לדעת אם הוא עותק יחיד, נמוך או גבוה כמו זה ישפיע אשר ascospore (ים) לקבל את הפלסמיד ואת ישפיע התחזי…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222