Zur Untersuchung der Entwicklungsprozesse von Ascosporen in Gibberella zeae, ein Verfahren für die Sammlung unter sterilen Bedingungen gefilmt wird, um ein Höchstmaß an Informationen für die Protokoll-Beschreibung zu generieren. Dies sollte die Reproduzierbarkeit der Experimente, ein entscheidender Aspekt, wenn sie voll Genom Expressionsprofil Tests durchgeführt werden.
Abstract
Fusarium graminearum Schwabe (Teleomorph Gibberella zeae) ist eine Pflanzenart Erreger Schorf Krankheit an Weizen und Gerste, die Ernteerträge und Kornqualität reduziert. F. graminearum verursacht auch Stiel und Ohr verrottet von Mais und ist ein Hersteller von Mykotoxinen, wie die Trichothecene, dass das Getreide verunreinigen und sind schädlich für Mensch und Vieh (Goswami und Kistler, 2004). Der Pilz produziert zwei Arten von Sporen. Ascosporen werden die Ableger, die sich aus der sexuellen Fortpflanzung, die Hauptquelle der primären Infektion. Diese Sporen werden gewaltsam aus reifen Perithecien entladen und verteilt durch den Wind (Francl et al 1999). Sekundäre Infektionen werden vor allem durch Makrokonidien die durch ungeschlechtliche bedeutet auf der Pflanze produziert werden verursacht. Zur Untersuchung der Entwicklungsprozesse von Ascosporen in diesem Pilz wurde ein Verfahren für ihre Sammlung in großen Mengen unter sterilen Bedingungen erforderlich. Unser Protokoll wurde gefilmt, um ein Höchstmaß an Informationen für das Verständnis und die Reproduzierbarkeit zu erzeugen; entscheidende Aspekte, wenn sie voll Genom Genexpressionsprofile generiert und interpretiert werden. Insbesondere sind die Variabilität der Ascosporen Keimung und die biologische Aktivität abhängig von der vorherigen Manipulation des Materials. Die Verwendung von Video zu dokumentieren jeden Schritt in Ascosporen Produktion wird vorgeschlagen, um die Standardisierung zu erhöhen, die Einhaltung der immer strengeren Anforderungen für die Microarray-Analyse. Das Verfahren erfordert nur Standard-Laborgeräte. Schritte gezeigt, um Verunreinigung und für die Zeitsynchronisation von Ascosporen zu verhindern.
Protocol
Carrot-Agar (Klittich und Leslie, 1988) wurde in 9-cm Durchmesser Petrischalen vorbereitet. A 2 mm Kantenlänge von Agar mit frischem Mycel auf Kartoffel-Dextrose-Agar gewachsen war, die Mitte jeder Petrischale aufgebracht. Die Kulturen wurden bei 25 ° C gezüchtet und eine 12-h Photoperiode für 96 Stunden. Ein ml wässrige 2,5% Tween 60 wurde auf die Oberfläche der Kultur (Trail und Common, 2000) aufgetragen und über die Kultur mit einem Kunststoff-Stab, durch leichtes Drücken. Perithecien …
Discussion
Das Protokoll hier vorgestellte auf früheren Verfahren für perithecial Produktion für Fusarium spp verwendet wird. (Klittich und Leslie, 1988; Trail und Common, 2000). Die Standardisierung der Verfahren, mit dem große Mengen von Ascosporen (ausreichend für Microarray-Analyse) generiert wurden war wesentlich für die Reproduzierbarkeit der Experimente. Es wurde berichtet, dass Umweltfaktoren, Alter und Substrat Unterschiede kann die biologische Charakter der Ascosporen (Beyer und Verreet, 2005) zu ändern. Daher ist die Verwendung von V…
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich Karen Hilburn für einen ausgezeichneten technischen Support. Dieses Projekt wurde von der National Research Initiative des USDA Cooperative State Research, Education and Extension Service (Preis # 2004-35604-14327) unterstützt. Matias Pasquali wird von Branco Weiss Fellowship unterstützt. Die US-Weizen und Gerste Scab Initiative ist auch für die fortgesetzte Unterstützung der Forschung anerkannt.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Petri dish 9 cm Diameter
Tool
Tween 60 (20%)
Reagent
Carrot agar (20% w/v organic carrots and 1.5% w/v agar)
Beyer, M., Verreet, J. A., Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J., Goswami, R. S., Kistler, H. C., Klittich, C. J. R., Leslie, J. F., Trail, F., Common, R., Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E., Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors.Genética. 118, 417-2013 (2005).
Pasquali, M., Kistler, C. Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.. J. Vis. Exp. (1), e115, doi:10.3791/115 (2006).