העברת גרעין לתוך ביציות עכבר
Summary
הסרט הזה ואת פרוטוקול נועדו לסייע למידה העברת גרעיני.
Abstract
העברת הגרעין אל תוך הביצית מופרית ניתן לשחזר את הפוטנציאל ההתפתחותי לתא מובחן. זה מוכיח כי התהליכים הבסיסיים, פיתוח הבחנה והזדקנות הם epigenetic ולא תהליכים גנטיים. הפיכות של תהליכים אלה פותחת אופקים מרגש במחקר בסיסי, ובעתיד הרחוק יותר, ברפואה רגנרטיבית. בשנת העכבר, בתאי גזע עובריים ניתן לגזור מעוברים משובטים preimplantation הבמה. אלה בתאי גזע עובריים יש את היכולת להצמיח את כל סוגי התאים של האורגניזם הבוגר. חשוב לציין, התאים האלה זהים מבחינה גנטית לתורם. אם החלים על האדם, זו תאפשר גזירת בתאי גזע מחולה. תאים אלה ניתן יהיה סוג מובחן לתוך התא הפגוע של החולה ולמד במבחנה, או להשתמש בו כדי להחליף תאים פגומים או חסרים. המחקר של העברת גרעיני העכבר נשאר חשוב כפי שהוא יכול להודיע לנו על עקרונות תכנות מחדש של גרעיני. זה סרט המלווה את הפרוטוקול נועדו לסייע למידה העברת גרעיני העכבר, שיטה שפותחה לראשונה בקבוצה של פרופ 'Yanagimachi (וואקאיאמה et al. 1998).
Protocol
Discussion
מזל טוב!
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE רוצה להודות לד"ר הסתר Akutsu לשיתוף NT הטריקים שלו, ד"ר סטפן סאליבן גארט Birkhoff על קריאה ביקורתית של הפרוטוקול.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
Referências
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
