Ten film i protokół mają pomóc nauki transfer jądra.
Abstract
Transfer jądra do zapłodnione komórki jajowej może przywrócić potencjału rozwojowego do zróżnicowanych komórek. To pokazuje, że procesy leżące u podstaw rozwoju, różnicowania i starzenie się są epigenetyczne, a nie genetyczne procesy. Odwracalności tych procesów otwiera ekscytujące perspektyw w zakresie badań podstawowych, a w bardziej odległej przyszłości, w medycynie regeneracyjnej. U myszy, embrionalnych komórek macierzystych mogą być uzyskane ze sklonowanych zarodków etapie preimplantacyjnej. Takie embrionalne komórki macierzyste mają zdolność do prowadzić do wszystkich typów komórek dorosłego organizmu. Co ważne, te komórki są genetycznie identyczne z dawcą. Jeśli zastosowanie do człowieka, pozwoli na wyprowadzenie komórek macierzystych od pacjenta. Komórki te mogą następnie być zróżnicowane w których to dotyczy typ komórek pacjenta oraz badania in vitro, lub stosowane w celu zastąpienia uszkodzonych lub brakujących ogniw. Badanie transfer jądra u myszy pozostaje istotne, ponieważ mogą nas informować o zasadach jądrowej przeprogramowania. Ten film i towarzyszący mu protokół mają pomóc nauki transfer jądra u myszy, metoda opracowana początkowo w grupie prof Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocol
Przetwory: Szczegółowy opis superowulacja i mikrokropla kultury zarodka można znaleźć gdzie indziej 2. Przygotować naczynie Petriego z mikrokropel pożywce zarodków (np. KSOM, Chemicon). Pokrywa z oleju mineralnego (partii oleju mineralnego powinny być testowane na zgodność z kultury zarodków). Uzyskania temperatury 37 ° C w powietrzu plus 5% CO 2. (W Thermo-Electron 3110 wody inkubator z płaszczem lub odpowiednik) <li class…
Discussion
Powodzenia!
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE pragnie podziękować dr Ukryj Akutsu za podzielenie się swoją NT sztuczki i dr Stephen Sullivan i Garrett Birkhoff do krytycznej lektury protokołu.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Cytochalastin B
Sigma
100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride
10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts
Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts
Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA
Sigma
P-8136
cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP
Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP
ICN Biochemicals
MW 360000
Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.