Este filme eo protocolo são destinados a ajudar o aprendizado de transferência nuclear.
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Artigo de método
Transferência nuclear em oócitos de camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Transferência nuclear para um ovócito não fertilizado pode restaurar potencial de desenvolvimento de uma célula diferenciada. Isso demonstra que os processos subjacentes de diferenciação, desenvolvimento e envelhecimento são epigenético ao invés de processos genéticos. A reversibilidade desses processos abre perspectivas interessantes na pesquisa básica, e no futuro mais distante, na medicina regenerativa. Em camundongos, as células-tronco embrionárias podem ser derivadas de embriões clonados estágio de pré-implantação. Tais células-tronco embrionárias têm a capacidade de dar origem a todos os tipos de células do organismo adulto. Importante, estas células são geneticamente idênticos ao doador. Se aplicável ao ser humano, isso permitiria que a derivação de células-tronco de um paciente. Essas células poderiam então ser diferenciados para o tipo de célula afetada do paciente e estudou in vitro, ou usado para substituir as células danificadas ou em falta. O estudo da transferência nuclear no mouse continua a ser importante, pois ele pode nos informar sobre os princípios da reprogramação nuclear. Este filme e que acompanha o protocolo se destinam a ajudar o aprendizado de transferência nuclear no mouse, um método desenvolvido inicialmente no grupo do Prof Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocolo
Preparações:
- A descrição detalhada de superovulação e cultura de embriões microdrop pode ser encontrada em outro lugar 2.
- Prepare uma placa de Petri com microgotas de meio de cultura de embriões (por exemplo, KSOM, Chemicon). Cubra com óleo mineral (óleo mineral lotes devem ser testados para compatibilidade com a cultura de embriões). Equilibrar a 37 ° C no ar mais 5% de CO 2. (Em Thermo Electron-3110 incubadora de água jacketed ou equivalente)
- Preparar um prato para o isolamento de oócitos: Gotas Local de tampão HEPES CZB e hialuronidase (0,1% w / v, Sigma) na ....
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Discussão
Boa sorte!
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
DE gostaria de agradecer ao Dr. Esconder Akutsu para compartilhar suas NT truques e Dr. Stephen Sullivan e Garrett Birkhoff para a leitura crítica do protocolo.
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Materiais
Por favor verifique para composições adicionais buffers na parte Protocol.
Referências
- Eggan, K., Jaenisch, R. Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. Pease, S., Lois, C. , Springer. (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Manipulating the mouse embryo. Press, C. S. H. L. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R.
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Reimpressões e permissões
