人間の膵島単離：パートII：ヒト膵島の精製と文化
Summary
ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。修正された自動化された方法を使用して：このビデオでは、我々は人間の膵島の分離（ヒト膵島の精製と文化部II）の手順をステップバイステップで説明します。
Abstract
1型糖尿病の管理は、年間1,000億ドルで、個人と社会の両方に、厄介です。グルコースモニタリングと新しいインスリン製剤の普及にもかかわらず、多くの個人はまだ壊滅的な二次的合併症を開発する。膵島移植は、糖尿病患者における正常血糖コントロールの近くに復元することができます<sup> 1</sup>、集中的なインスリン療法に関連付けられている重篤な低血糖エピソードのリスクなし。十分な膵島質量を提供することに成功した膵島移植のために重要です。しかし、ドナーの特性、臓器の調達と保存には、分離結果に影響を及ぼす<sup> 2</sup>。イリノイ大学シカゴ校（UIC）で我々は改善された精製勾配で成功した分離プロトコルを開発<sup> 3</sup>。プログラムは、2004年1月に始まり、300以上のアイソレーションは、2008年11月までに実施された。膵臓は冷たい保存液（UW、ウィスコンシン州またはHTKの大学、ヒスチジン – トリプトファンケトグルタル酸）に送られ、<sup> 4月7日</sup>膵島分離のためのUICにおける細胞分離の研究室へ。膵島は、もともとRicordiの記載された方法を改変したものですUIC方法を、用いて単離された<em>ら</em><sup> 8</sup>。第I部で説明したように：膵組織の消化やコレクション、人間の膵臓は、トリミングカニューレ、灌流、および消化した。コレクションとUW液のインキュベーションの少なくとも30分後、組織は浄化のために（COBE 2991年、COBE、レイクウッド、CO）細胞分離装置にロードされています<sup> 3</sup>。以下の精製、膵島の収量（膵島同等、IEQとして表される）、組織のボリューム、および純度は、標準的な方法にしたがって決定された<sup> 9</sup>。隔離された島はCMRL - 1066 1.5パーセントヒトアルブミン、0.1％インスリン – トランスフェリン – セレン（ITS）、シプロフロキサシン、1M HEPES 5 mlの1mlの添加培地（Mediatech、ハーンドン、バージニア州）、および14.5 mlの培養した37 T175フラスコに7.5％重炭酸ナトリウム° C一晩培養膵島を移植または研究のために使用される前に。
Protocol
Discussion
人間の膵島分離の技術において著しい進歩にもかかわらず、膵島の収量は非常に変化し、予測不能のまま。消化された膵組織の精製は、移植のための成功した酵素消化後に十分な島の質量を回復することが重要です。高純度ヒト膵島の優れた回復がこのメソッドを使用して実証されたためUIC精製法が推奨されます。また、消化された組織の最大50 mlをこのように分離に使用される合計時間を?…
Acknowledgements
イリノイ大学シカゴ校から設立だけでなく、膵島細胞リソースセンターNIHの助成金（RFA – RR 05から003）、クリストファー財団、Efroymson財団、およびテラブス財団によってサポート。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | equipment | Gambro. BCT | 2556 | islet purification |
| MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
| Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
| Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
| COBE bag | disposable equipment | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 culture flask | disposable equipment | Sarstedt | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagent | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
| Final wash/Culture Medium | reagent | Mediatech Inc | 99-785-CV | |
| Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |
Referências
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function. Diabetologia. 48, 906-912 (2005).
- Barbaro, B. Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient. Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).
- Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance. Transplantation. 59, 689-694 (1995).
- Fridell, J. A. Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation. Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).
- Potdar, S. Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation. Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).
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- Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. Automated islet isolation from human pancreas. Diabetes. 38 Suppl 1, 140-142 (1989).
- Ricordi, C. Islet isolation assessment in man and large animals. Acta Diabetol Lat. 27, 185-195 (1990).
