Purification des mitochondries de cellules de levure
Summary
Nous décrivons une méthode rapide et efficace pour la purification des mitochondries de la levure<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Cette méthode permet l'isolement à haut rendement des mitochondries pures qui sont essentiellement exempt de contamination par d'autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification.
Abstract
Les mitochondries sont le site principal de production d'ATP au cours du métabolisme aérobie dans eucaryotes non photosynthétiques cellules<sup> 1</sup>. Ces organites complexes jouent également un rôle essentiel dans la mort cellulaire par apoptose<sup> 2</sup> La survie cellulaire,<sup> 3</sup>, Le développement des mammifères<sup> 4</sup>, Le développement neuronal et la fonction<sup> 4</sup>, Signalisation intracellulaire<sup> 5</sup>, La réglementation et la longévité<sup> 6</sup>. Notre compréhension de ces processus biologiques complexes contrôlés par les mitochondries s'appuie sur des méthodes robustes pour évaluer leur morphologie, leurs protéines et la composition lipidique, de l'intégrité de leur ADN, et leurs nombreuses fonctions vitales. La levure bourgeonnante<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Un eucaryote génétiquement et biochimiquement manipulable avec des unicellulaires génome annoté et bien définies protéome, est un précieux modèle pour étudier les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans des fonctions biologiques essentielles des mitochondries. Pour ces types d'études, il est crucial d'avoir des mitochondries très pure. Nous présentons ici une description détaillée d'une méthode rapide et efficace pour la purification des mitochondries de levure. Cette méthode permet l'isolement des mitochondries très pures qui sont essentiellement exempt de contamination par d'autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification. Les mitochondries purifiées par cette méthode sont adaptés à la cellule sans reconstitution des processus essentiels mitochondriale et peut être utilisé pour l'analyse de la structure et les fonctions mitochondriales, mitochondriale protéome et lipidome, et l'ADN mitochondrial.
Protocol
Discussion
Cette méthode permet l'isolement à haut rendement des mitochondries pur à partir de cellules de levure. Les mitochondries purifiées par cette méthode sont essentiellement libres de contamination par d'autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification. Les rendements méthode décrite mitochondries qui sont adaptés à la cellule sans reconstitution des processus essentiels mitochondriale. Ces mitochondries très purs peuvent aussi être utilisées pour l&#…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions des IRSC et le CRSNG du Canada. VIT est une nouvelle chercheuse des IRSC et président de Concordia recherche universitaire en génomique, biologie cellulaire et le vieillissement.
Referências
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , (2004).
- Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival. Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).
- Detmer, S. A., Chan, D. C. Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).
- McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. Mitochondria: more than just a powerhouse. Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).
- Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. Mitochondria, oxidants, and aging. Cell. 120, 483-495 (2005).
