Dissectie van 6,5 dpc muizenembryo's

Summary

Isolatie van postimplantatie-stage embryo's maakt het mogelijk om genen patronen te bestuderen en cel-afkomst besluitvorming tijdens de embryonale ontwikkeling te analyseren, maar een goede dissectie van het vroege embryo kan een uitdaging zijn. Dit protocol beschrijft een methode voor het isoleren van vroege primitieve-streep-stadium embryo's (~ 6,5 dagen na de coitum [DPC]).

Abstract

Analyse van genexpressie patronen tijdens de vroege stadia van de embryonale ontwikkeling van zoogdieren kan belangrijke aanwijzingen over genfunctie, cel-cel interactie en signaleren mechanismen die leiden embryonale patronen. Echter, dissectie van de muis embryo van de decidua kort na de implantatie een uitdagende procedure, en gedetailleerde stap-voor-stap documentatie van dit proces ontbreekt.

Hier laten we zien hoe de post-implantatie (6,5 dpc) embryo's worden geïsoleerd door eerst het ontleden van de baarmoeder van een zwangere muis (detectie van de vaginale plug was aangewezen dag 0,5 poist coitum) en vervolgens ontleden van het embryo uit het maternale decidua. De ontleding van membraan Reichert is beschreven, evenals de verwijdering van de ectoplacental kegel.

Protocol

Dissectie van de voortplantingsorganen van een vrouwelijke muis Drachtige dieren worden gedood door de CO 2 stikken met behulp van samengeperst gas. Leg het dier rugligging op absorberend kussen en laat deze in 70% ethanol om het risico van besmetting van de dissectie met de muis haar te verminderen. Knijp de huid en maakt een kleine incisie aan de laterale middellijn met regelmatige chirurgische schaar. Houd de huid stevig vast boven en onder de incisie en uit elkaar te trekken …

Discussion

Postimplantatie in de muis optreedt tussen 4,5 dpc en geboorte. Deze dissectie methode kan worden toegepast, in hoofdzaak zoals beschreven, om eerder of later stadium embryo's te isoleren op 5,5-8,5 DPC.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope