Dissection de 6,5 embryons de souris DPC

Summary

L'isolement des embryons au stade post-implantation permet d'étudier la structuration génétique et d'analyser les cellules de lignée processus de décision durant le développement embryonnaire, mais la dissection adéquate de l'embryon précoce peut s'avérer difficile. Ce protocole décrit une méthode pour isoler début primitive-série au stade d'embryons (~ 6,5 jours post coïtum [DPC]).

Abstract

L'analyse des profils d'expression génique au cours des étapes précoces du développement embryonnaire chez les mammifères peuvent fournir des indices importants sur la fonction du gène, cellule-cellule d'interaction et les mécanismes de signalisation qui guident la structuration embryonnaire. Cependant, la dissection de l'embryon de souris de la decidua peu après l'implantation peut être une procédure difficile et détaillées étape par étape la documentation de ce processus fait défaut.

Ici, nous montrons comment post-implantation (6,5 DPC) embryons sont isolés d'abord disséquer l'utérus d'une souris enceintes (détection de l'coïtum jour poist bouchon vaginal a été désigné 0,5) et ensuite disséquer l'embryon à partir decidua maternelle. La dissection de la membrane de Reichert est décrite ainsi que la suppression du cône ectoplacentaire.

Protocol

Dissection des organes reproducteurs d'une souris femelle Les femelles gravides sont euthanasiés par asphyxie à l'aide de CO 2 de gaz comprimé. Posez le dos des animaux sur le tampon absorbant et la tremper dans de l'éthanol à 70% pour réduire le risque de contamination de la dissection avec les cheveux de la souris. Pincer la peau et de faire une petite incision latérale à la ligne médiane avec des ciseaux chirurgicaux réguliers. Tenez fermement la peau des…

Discussion

Postimplantatoire chez la souris se situe entre 4,5 DPC et de la naissance. Cette méthode de dissection peut être appliquée, essentiellement comme décrit, d'isoler plus tôt ou plus tard au stade de 5.5 à 8.5 embryons DPC.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope