Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

Summary

Isolamento di post-impianto di embrioni allo stadio permette di studiare e analizzare patterning gene cellulari lignaggio processi decisionali durante lo sviluppo embrionale, ma corretta dissezione dell'embrione precoce può essere difficile. Questo protocollo descrive un metodo per isolare primi primitivo-striscia-stadio embrioni (~ 6,5 giorni post coitum [dpc]).

Abstract

Analisi dei modelli di espressione genica durante le prime fasi di sviluppo embrionale dei mammiferi in grado di fornire importanti indizi circa la funzione del gene, l'interazione cellula-cellula e meccanismi di segnalazione che patterning guida embrionale. Tuttavia, la dissezione dell'embrione mouse dal decidua poco dopo l'impianto può essere un procedimento impegnativo e dettagliato passo-passo la documentazione di questo processo è carente.

Qui mostriamo come post-impianto (6,5 DPC) sono isolate da embrioni prima dissezione nell'utero di un topo gravide (rilevamento del tappo vaginale è stato designato giorni 0,5 coitum poist) e poi sezionare l'embrione da decidua materna. La dissezione della membrana Reichert è descritto così come la rimozione del cono ectoplacental.

Protocol

Dissezione di organi riproduttivi di un topo femmina Animali gravidi sono eutanasia da CO 2 asfissia con gas compresso. L'animale giaceva supino sul tampone assorbente e immergerlo in etanolo al 70% per ridurre il rischio di contaminare la dissezione con i capelli del mouse. Pizzicare la pelle e fare una piccola incisione laterale alla linea mediana con regolare forbici chirurgiche. Tenere la pelle saldamente sopra e sotto l'incisione e tirare la pelle a parte verso la te…

Discussion

Post-impianto nel topo si verifica tra 4,5 dpc e la nascita. Questo metodo può essere applicato dissezione, essenzialmente come descritto, per isolare prima o dopo gli embrioni scena al 5,5-8,5 dpc.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope