Препарирование 6,5 Эмбрионы DPC мышь

Summary

Выделение постимплантационных стадии эмбрионов позволяет исследовать геном структурирования и анализа клеточных линии процессах принятия решений во время эмбрионального развития, но надлежащего вскрытия раннего эмбриона может оказаться непростой задачей. Этот протокол описывает метод выделения ранних примитивных-штрих стадии эмбрионов (~ 6,5 дней после coitum [DPC]).

Abstract

Анализ моделей экспрессии генов на ранних стадиях эмбрионального развития млекопитающих может предоставить важную информацию о функции гена, межклеточных взаимодействий и сигнальных механизмов, которыми руководствуются эмбриональных кучность стрельбы. Тем не менее, рассечение эмбриона мыши с децидуальной вскоре после имплантации может быть сложной процедурой, а также подробные шаг за шагом документации этого процесса отсутствует.

Здесь показано, как после имплантации (6,5 DPC) эмбрионы выделяли первых рассекает матку беременных мышей (обнаружение вагинальные плагин был назначен день 0,5 poist coitum), а затем рассекает эмбриона от материнского децидуальной. Рассечение мембраны Reichert это описано, а также удаление ectoplacental конуса.

Protocol

Препарирование репродуктивных органов у женщин мыши Беременных животных усыпляют СО 2 удушение с помощью сжатого газа. Положите животное на спине на абсорбирующую прокладку и положите его в 70% этанола, чтобы уменьшить риск загрязнения вскрытия с помощью мыши волос. …

Discussion

Постимплантационных у мышей происходит между 4,5 DPC и рождения. Это рассечение метод может быть применен, по существу, как описано, чтобы изолировать раньше или поздней стадии эмбрионов на 5.5-8.5 DPC.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope