La disección de embriones de ratón 6,5 dpc

Summary

El aislamiento de embriones etapa post-implantación, permite estudiar los patrones de genes y analizar células de linaje toma de decisiones durante el desarrollo embrionario, aunque la disección adecuada del embrión temprano puede ser un desafío. Este protocolo describe un método para aislar las primeras etapas primitivas racha de embriones (~ 6,5 días post coitum [dpc]).

Abstract

Análisis de patrones de expresión génica durante las primeras etapas del desarrollo embrionario de mamíferos pueden proporcionar pistas importantes sobre la función del gen, la célula-célula la interacción y los mecanismos de señalización que guía los patrones embrionarias. Sin embargo, la disección del embrión de ratón de la decidua, poco después de la implantación puede ser un procedimiento difícil y detalladas paso a paso la documentación de este proceso es insuficiente.

Aquí se demuestra cómo después de la implantación (6,5 dpc), los embriones se encuentran aisladas por primera disección del útero de un ratón embarazadas (detección de coitum el tapón vaginal fue designado poist días 0,5) y, posteriormente, la disección del embrión a partir de la decidua materna. La disección de la membrana de Reichert se describe así como la eliminación del cono ectoplacental.

Protocol

La disección de los órganos reproductores de una hembra de ratón Los animales en gestación son sacrificados por asfixia de CO 2 de gas comprimido. Coloque el animal en decúbito supino almohadilla absorbente y sumergirlo en etanol al 70% para reducir el riesgo de contaminación de la disección con el pelo del ratón. Pellizcar la piel y hacer una pequeña incisión lateral en la línea media con regulares tijeras quirúrgicas. Mantener la piel firme por encima y por debajo d…

Discussion

Post-implantación en el ratón produce entre 4,5 dpc y el parto. Este método de disección puede ser aplicado, esencialmente como se describe, para aislar antes o después de los embriones en etapa de 5.5-8.5 DPC.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope