Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Summary

Isolering av postimplantation steg embryon som gör att man kan studera gen mönstring och analysera cell-härstamning beslutsprocesser under fosterutvecklingen, men ordentlig dissekering av det tidiga embryot kan vara en utmaning. Detta protokoll beskriver en metod för att isolera tidiga primitiva-strimma steg embryon (~ 6,5 dagar efter coitum [DPC]).

Abstract

Analys av mönster genuttryck under tidiga stadier av däggdjurs embryonala utveckling kan ge viktiga ledtrådar om geners funktion, cell-cell interaktion och signalering mekanismer som styr embryonala mönster. Däremot kan dissekering av musen embryot från decidua kort efter implantation vara en utmanande förfarande och detaljerade steg-för-steg dokumentation av denna process saknas.

Här kan vi visa hur post-implantation (6,5 DPC) embryon som är isolerade genom att först dissekera livmodern av en gravid mus (detektion av vaginala kontakten utsågs dag 0,5 poist coitum) och därefter dissekera ett embryo från moderns decidua. Dissektion av Reichert membran beskrivs samt borttagning av ectoplacental konen.

Protocol

Dissekering av reproduktiva organ från en kvinnlig mus Gravida djur avlivas av CO 2 kvävning med komprimerad gas. Lägg djuret liggande på absorptionsdyna och dränk den i 70% etanol för att minska risken för kontaminering av dissektion med musen hår. Nyp ihop huden och gör en liten laterala snitt vid mittlinjen med vanlig kirurgisk sax. Håll huden ordentligt över och under snittet och dra i huden isär mot huvud och svans för att avslöja buken. Ta tag i bukh…

Discussion

Postimplantation hos mus sker mellan 4,5 DPC och födelse. Denna dissektion metod kan tillämpas i huvudsak enligt beskrivningen, att isolera tidigare eller senare skede embryon på 5,5-8,5 DPC.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope