Summary

Synthèse et d'étalonnage des nanosondes phosphorescent pour l'imagerie oxygène dans les systèmes biologiques

Published: March 03, 2010
doi:

Summary

Nous présentons les principes de mesures d'oxygène par trempe phosphorescence et la conception de la révision à base de porphyrine nanocapteurs dendritiques pour l'imagerie d'oxygène dans les systèmes biologiques.

Abstract

Mesure de l'oxygène par trempe phosphorescence [1, 2] est constituée des étapes suivantes: 1) la sonde est livrée dans le milieu d'intérêt (par exemple le sang ou le liquide interstitiel), 2) l'objet est éclairé par une lumière de longueur d'onde appropriée afin d'exciter la sonde dans son état triplet, 3) la phosphorescence émise est collectée, et son cours du temps est analysée pour obtenir la durée de vie de phosphorescence, qui est converti en la concentration d'oxygène (ou pression partielle, pO<sub> 2</sub>). La sonde ne doit pas interagir avec l'environnement biologique et, dans certains cas être 4) excrété dans le milieu lors de l'achèvement de mesure. Chacune de ces étapes impose des exigences sur la conception moléculaire des sondes phosphorescents, qui constituent la seule composante invasive du protocole de mesure. Ici nous passons en revue la conception de dendritiques nanocapteurs phosphorescentes pour les mesures de l'oxygène dans les systèmes biologiques. Les sondes sont constituées de Pt ou Pd à base de porphyrine polyarylglycine (AG) dendrimères, modifié en périphérie avec du polyéthylène glycol (PEG) de résidus. Pour effective excitation à deux photons, terminus des dendrimères peuvent être modifiées avec deux photons chromophores antennes qui captent l'énergie d'excitation et de les diriger vers les noyaux triplet des sondes FRET intramoléculaire via (Transfert Förster Resonance Energy). Nous décrivons les principales propriétés photophysiques des sondes et de présenter des protocoles d'étalonnage détaillé.

Protocol

1. Description générale du protocole de mesure de l'oxygène (Cette section ne dispose pas de toute action, mais elle est cruciale pour comprendre le reste du papier. Il peut être filmé, par exemple, comme une séquence de quelques diapositives Power Point, accompagné par la voix.) 1.1) La sonde est livrée dans le milieu de l'intérêt, par exemple, injecté dans le sang ou de liquide interstitiel d'un animal. 1.2) L&#…

Acknowledgements

Soutien de l'EB007279 subventions et HL081273 NIH des Etats-Unis est grandement appréciée.

Materials

Abbreviation Full name
NMP N-methylpyrrolidinone
TFA trifluoroacetic acid
DIPEA diisopropylethylamine
HBTU 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
DMSO dimethylsulfoxide
CDMT CDMT=1-chloro-3,5-dimethoxytriazine
NMM NMM=N-methylmorfoline

Referências

  1. Vanderkooi, J. M., Maniara, G., Green, T. J., Wilson, D. F. An optical method for measurement of dioxygen concentration based on quenching of phosphorescence. J. Biol. Chem. 262, 5476-5482 (1987).
  2. Rumsey, W. L., Vanderkooi, J. M., Wilson, D. F. Imaging of phosphorescence: A novel method for measuring the distribution of oxygen in perfused tissue. Science. 241, 1649-1651 (1988).
  3. Lebedev, A. Y. Dendritic phosphorescent probes for oxygen Imaging in biological systems. Acs Applied Materials and Interfaces. 1, 1292-1304 (2009).
  4. Finikova, O. S., Cheprakov, A. V., Beletskaya, I. P., Carroll, P. J., Vinogradov, S. A. Novel versatile synthesis of substituted tetrabenzoporphyrins. Journal of Organic Chemistry. 69, 522-535 (2004).
  5. Lindsey, J. S., Schreiman, I. C., Hsu, H. C., Kearney, P. C., Marguerettaz, A. M. Rothemund and Adler-Longo Reactions revisited: Synthesis of tetraphenylporphyrins under equilibrium conditions. Journal of Organic Chemistry. 52, 827-836 (1987).
  6. Lebedev, A. Y., Troxler, T., Vinogradov, S. A. Design of metalloporphyrin-based dendritic nanoprobes for two-photon microscopy of oxygen. J. Porphyrins and Phthalocyanines. 12, 1261-1269 (2008).
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Citar este artigo
Sinks, L. E., Roussakis, E., Esipova, T. V., Vinogradov, S. A. Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems. J. Vis. Exp. (37), e1731, doi:10.3791/1731 (2010).

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