Summary

Ferumoxides의 이식은 연골의 결함에 인간 Mesenchymal 줄기 세포로 표시

Published: April 05, 2010
doi:

Summary

프레 젠 테이션의 목표는 MR 영상과 시각 수있는 연골의 결함에 매트릭스 관련 줄기 세포 이식을 생성하는 높은 재현성 방법을 입증하는 것입니다. 줄기 세포는 아가로 오스와 혼합 FDA 승인 Ferumoxides, 연골의 결함에 심어 및 7T MR 스캐너와 함께 몇 군데으로 표시됩니다.

Abstract

조직 공학 분야는 특정 세포 기능 조직의 재생을 향해 공학, 세포 생물학 및 의학의 원리를 통합합니다. 매트릭스 관련 줄기 세포 이식 (마시는) arthritic 또는 외상성 관절 부상으로 인해 연골의 결함을 재생하는 것을 목표로하고 있습니다. 성인 mesenchymal 줄기 세포 (MSCS)는 chondrogenic 혈통의 세포로 차별화할 수있는 능력을 가지고 셀 기반의 관절 연골 수리 기술에 대한 유망한 결과를 보여주었다. Autologous MSCS는, 조직의 다양한 격리 수들은 차별의 잠재력을 그대로 유지한 채 셀 문화에 확장 될 수 있으며, 체외에서 생체내 1, 2 chondrogenic 차별을 증명하고있다.

연골의 결함 지역 유지 및 이식 MSCS의 생존을 제공하기 위해 발판도 후속 차별과 확산을 지원하는, 필요합니다. 발판 가이드 조직 형성의 아키텍처 및 줄기 세포에 의해 생산되는 세포외 매트릭스가, 확장 수 있습니다. 이전 조사는 2 % 아가로 오스 비계가 안정 유리 모양의 연골의 개발을 지원할 수 및 면역 반응에게 3 유발하지 않는 것으로 나타났습니다.

마시에 이식 줄기 세포의 장기 보관은 연골의 재생을 위해 중요합니다. 철 산화물 nanoparticles와 MSCS의 라벨링하는 비침습 MR 영상 기법 4 생체내 추적의 장기를 허용합니다.

이 프레 젠 테이션은 철 산화물 nanoparticles와 라벨 MSCS, 연골의 결함으로 이러한 구조의 셀 – 아가로 오스의 구성 및 이식의 생성에 대한 기술을 설명합니다. 분류 구조는 MR – 이미징과 비 invasively 추적할 수 있습니다.

Protocol

1. Endorem과 hMSCs의 라벨링 전지는 적어도 18시간 라벨 전에 80 %를 합류로 성장하고 있습니다. 이 기간 동안, 라벨 미디어는 100 UG 철 / ML 혈청이없는 미디어의 복용량에있는 예제 Endorem을 추가하여 준비가되어 있습니다. 세포가 합류로 성장 후, 문화, 미디어 aspirated되고 세포는 PBS 또는 혈청 무료 매체와 1X 세탁 있습니다. 다음, 린스 솔루션 aspirated되고 이전에 준비 라벨…

Discussion

설명 프로토콜은 철 산화물 nanoparticles와 MSCS를 라벨 및 연골의 결함으로 이러한 레이블 MSCS를 이식하는 재현할 방법을 제공합니다. 이 기술은 마시 장애의 조기 발견을 허용 MR 영상과 연골의 결함에 줄기 세포 이식의 비침습 묘사를 허용합니다. 라벨 세포의 전위 또는 유출은 MR 영상에서 이식 사이트에서 라벨의 실종에 따라 진단할 수 있습니다. 이러한 이벤트의 초기 진단 바람직하고 불필요한 ?…

Acknowledgements

이 작품은 관절염의 국립 연구소 Musculoskeletal 피부병, NIH RO1AR054458에서 교부금에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
D-MEM High Glucose Reagent Sigma D5648  
PBS (Ca++, Mg++ free)   GIBCO 14190-144  
Trypsin-EDTA 0.05%   Invitrogen 25399-120  
FBS   Hyclone SH30071.03  
Penicillin/Streptomycin   GIBCO 15140-122  
Ferumoxides (Endorem) Guerbet    
Agarose Typ VII   Sigma A9045 Dilute Agarose in PBS to final concentration of 4%

Referências

  1. Mauck, R. L., Yuan, X., Tuan, R. S. Chondrogenic differentiation and functional maturation of bovine mesenchymal stem cells in long-term agarose culture. Osteoarthritis Cartilage. 14, 179-189 (2006).
  2. Pittenger, M. F. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 284, 143-147 (1999).
  3. Rahfoth, B. Transplantation of allograft chondrocytes embedded in agarose gel into cartilage defects of rabbits. Osteoarthritis Cartilage. 6, 50-65 (1998).
  4. Henning, T. D., Boddington, S., Daldrup-Link, H. E. Labeling hESCs and hMSCs with iron oxide nanoparticles for non-invasive in vivo tracking with MR imaging. J Vis Exp. , (2008).
check_url/pt/1793?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Nedopil, A. J., Mandrussow, L. G., Daldrup-Link, H. E. Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects. J. Vis. Exp. (38), e1793, doi:10.3791/1793 (2010).

View Video