Summary

Brustepithelzellen Transplantation

Published: June 10, 2010
doi:

Summary

Dieser Artikel veranschaulicht das Verfahren, nach DeOme KB entwickelt<em> Et al.</em> (1959) und den schonenden Verfahren von Brill B entwickelt<em> Et al.</em> (2008) für das Clearing der 4. inguinal Brustfettpolster eines pubertierenden Maus in Vorbereitung auf die Transplantation von Mamma-Fragmente, Brustepithelzellen oder Mamma-Tumorzellen.

Abstract

Dieser Artikel beschreibt und vergleicht die Fettpolster Genehmigungsverfahren durch DeOme KB et al. 1 und die schonende Verfahren Brill B et al. 2, gefolgt von der Brustepithelzellen Transplantation. Die Mamma-Transplantation wird häufig von Mamma Biologen verwendet, weil es nutzt die Tatsache, dass bedeutende Entwicklung der Milch-Epithel nicht bis nach der Pubertät auftreten. Am Alter von 3 Wochen wird das Wachstum der Brustepithelzellen Baum bis in die Nähe der Brustwarze beschränkt und das Fettpolster ist weitgehend frei von Mamma-Epithel, sondern durch Alter von 7 Wochen der epithelialen duktalen Baum erstreckt sich über die gesamte Fettpolster. Deshalb, wenn diese kleiner Teil der Fettpolster mit Epithel, die Region zwischen die Brustwarze und den Lymphknoten, im Alter von 3 Wochen entfernt wird, wird die endogene Epithel nie bevölkern die Brustfettpolster und die Fettpolster als "cleared beschrieben ". Zu diesem Zeitpunkt kann Mamma Epithel aus einer anderen Quelle in den geräumten Fettpolster, wo es das Potenzial hat, Mamma-duktales Bäume durch die Fettpolster zu erweitern transplantiert werden. Dieses Verfahren wurde in vielen experimentellen Modellen einschließlich der Prüfung von Tumor-Phänotyp in transgenen Brustepithelzellen Gewebe ohne die verwirrende Wirkung des Genotyps auf das gesamte Tier 3 verwendet worden, bei der Identifizierung von Mamma-Stammzellen durch die Transplantation von Zellen in limitierter Verdünnung 4,5, Bestimmung wenn hyperplastische Knötchen an Mammatumoren vor 6 und um die Wirkung der vor Hormon-Exposition auf das Verhalten der Milch-Epithel 7,8 zu bewerten.

Drei Wochen alte Host-Mäuse sind betäubt, gereinigt und zurückhaltend auf einer chirurgischen Bühne. Ein mittsagittale Schnitt durch die Haut, aber nicht das Bauchfell, die sich vom Schambein bis zum Brustbein. Schrägschnitte werden durch die Haut aus der Mitte des sagittalen Schnitt über dem Becken in Richtung jedem Bein. Die Haut wird vom Peritoneum bis zum 4. inguinal Brustdrüse freizulegen. Die Fettpolster wird durch Entfernen der Fettpolster Gewebe anterior der Lymphknoten gelöscht. Epithel-Fragmente oder Epithelzellen sind in den verbleibenden gelöscht Fettpolster transplantiert und die Maus ist geschlossen.

Protocol

1. Vorbereitung der Transplantation Epithel Frisches oder tiefgekühltes Spender Epithelgewebe lassen sich in den geräumten Fettpolster transplantiert werden, aber vor Zubereitung von Tiefkühl-Spender Epithel ist bequemer mit einem minimalen Rückgang der Transplantation Wirkungsgrad (> 85% Wirkungsgrad). Das Protokoll für die Zubereitung von Tiefkühl-Spender Epithel ist wie folgt: Vor der Zubereitung Spenders zu transplantieren Epithel, bereiten einfrieren …

Discussion

In diesem Bericht stellen wir zwei alternative Methoden zum Löschen der Maus Brustfettpolster in Vorbereitung Brustepithelzellen Transplantationen. Die Standard-Verfahren wird seit seiner Entwicklung 1959 von DeOme et al. 1 Während mehr invasive, ist die Standard-Methode die bevorzugte Methode für das Training der Anfänger, weil die Struktur und Ausrichtung der Brustdrüse leicht betrachtet werden. Allerdings kann die schonende Verfahren durch den erfahrenen Chirurgen, weil mehrere Vorteile

Referências

  1. DeOme, K. B., Faulkin, L. J., Bern, H. A., Blair, P. B. Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice. Cancer Res. 19, 515-520 (1959).
  2. Brill, B., Boecher, N., Groner, B., Shemanko, C. S. A sparing procedure to clear the mouse mammary fat pad of epithelial components for transplantation analysis. Laboratory Animals. 42, 104-110 (2008).
  3. Jerry, D. J., Kittrell, F. S., Kuperwasser, C., Laucirica, R., Dickinson, E. S., Bonilla, P. J., Butel, J. S., Medina, D. A mammary-specific model demonstrates the role of the p53 tumor suppressor gene in tumor development. Oncogene. 19, 1052-1058 (2000).
  4. Shackleton, M., Vaillant, F., Simpson, K. J., Stingl, J., Smyth, G. K., Asselin-Labat, M. -. L., Wu, L., Lindman, G. J., Visvader, J. E. Generation of a functional mammary gland from a single stem cell. Nature. 439, 84-88 (2006).
  5. Stingl, J., Eirew, P., Ricketson, I., Shackleton, M., Vaillant, F., Choi, D., Li, H. I., Eaves, C. J. Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells. Nature. 439, 993-997 (2006).
  6. Medina, D. Preneoplastic Lesions in Murine Mammary Cancer. Cancer Res. 36, 2589-2595 (1976).
  7. Wagner, K. -. U., Boulanger, C. A., Henry, S. g. a. g. i. a. s., Hennighausen, M., Smith, G. H. L. An adjunct mammary epithelial cell population in parous females: its role in functional adaptation and tissue renewal. Development. 129, 1377-1386 (2002).
  8. Dunphy, K. A., Blackburn, A. C., Haoheng, Y., O Connell, L. R., Jerry, D. J. Estrogen and progesterone induce persistent increases in p53-dependent apoptosis and suppress mammary tumors in BALB/c-Trp53+/- mice. Breast Cancer Res. 10 (3), R43-R43 (2008).
check_url/pt/1849?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Dunphy, K. A., Tao, L., Jerry, D. J. Mammary Epithelial Transplant Procedure. J. Vis. Exp. (40), e1849, doi:10.3791/1849 (2010).

View Video