Detta protokoll illustrerar tekniken för utvinning av ägg eller tidiga befruktade embryon från äggledare hos möss. Förmågan att identifiera infindibulum och sätt in en trubbiga änden nål i är det viktigt att korrekt hela proceduren.
Abstract
Hittills har endast ett fåtal studier som rapporterat framgångsrika manipulationer Peromyscus embryogenesen eller reproduktiva biologi. Tillsammans med Peromyscus Genetiska Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), vi är som kännetecknar de framträdande skillnader behövs för att utveckla detta system. Ett primärt mål har varit att optimera äggcellen / tidiga embryot hämtning.
Protocol
Embryot / Oocyte Minst två timmar före hämtning av embryon / ägg, är KSOM placeras i 37 º C CO 2 inkubator och FHM måste tinas från -20 °. En glasskål med tre konkav grunda brunnar används för att hysa droppar KSOM i inkubatorn. För att förhindra uttorkning, är KSOM och fat placeras i en lockförsedda behållare som har vatten i botten. Denna apparat förhindrar avdunstning utan användning av mineralolja. Den äggledarna från en ägglossning kvinnliga placeras…
Discussion
I denna artikel visar vi att hämta ägg från ägglossning-inducerad (superovulated) Peromyscus. Användningen av superovulation (i motsats till naturliga estrous cykel) är vanlig på grund av den mycket större resulterande numren. Dock måste försiktighet iakttas vid tolkningen av resultaten använda sådana oocyter / embryon, eftersom både de hormoner som används för att framkalla ägglossning och odling kan ha effekter.
När estrous har bekräftats, är kvinnor euthenized och äggledarna återhämtade tillsammans med en li…
Acknowledgements
Jag vill tacka Mike Dewey från Peromyscus genetiska Stock Centrum för hans hjälp, tålamod och kunskap.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing