FitC-Dextran Кормление: Метод количественной оценки проницаемости кишечника в C. elegans

Abstract

Источник: Le, T. A. N., et al. Измерение воздействия бактерий и химических веществ на проницаемость кишечника Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019). 

Это видео вводит метод визуализации и измерения целостности C. elegans кишечника люмена путем кормления червей FITC помечены декстран.  Пример протокола показывает анализ, проделанной с 3,3′-diindolylmethane (DIM)-обработанных и патогенных червей.

Protocol

Этот протокол является выдержка из Le et al, Измерение воздействия бактерий и химических веществ на кишечной проницаемости Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). <stro…

Representative Results

Рисунок 1: Влияние ДИМ на проницаемость кишечника C. elegans кормили P. aeruginosa. Микроскопические изображения червей из (A) E. coli OP50 без кормления FITC-декстран, ( B )E.</str…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N