人类胚胎干细胞定向分化成特定的细胞在再生医学产生了很大的兴趣。我们提供一个简洁,一步一步确定协议<em>在体内</em>细胞治疗为特征的组织特异性试剂,提供了一个有价值的工具选定的人类胚胎干细胞的命运。
人类胚胎干细胞(胚胎干细胞)具有无限的自我更新能力,并能分化成所有三个胚层(1)衍生的细胞。导演的人类胚胎干细胞分化成特定类型的细胞在再生医学领域(如(2-5))产生了很大的兴趣,并确定方法<em>在体内</em>选择或操纵胚胎干细胞的命运,这种努力是必不可少的。我们已经适应了用于此目的的高效的畸胎瘤形成实验。一个专门挑选的人类胚胎干细胞的数量少,混合的未分化的野生型胚胎干细胞和菜豆凝集素,形成一个细胞沉淀。这是嫁接在免疫缺陷小鼠的肾囊下方。数为2.5 × 10<sup> 5</sup>人类胚胎干细胞都需要形成一个16厘米<sup> 3</sup>在8-12周的畸胎瘤。最初选定的人类胚胎干细胞的命运,然后可以由免疫组织化学。这种方法提供了一个有价值的工具,用于描述特定组织细胞治疗试剂。
我们已经适应了一个高效的映射在体内环境中的人类胚胎干细胞分化的命运的目的畸胎瘤形成实验。一个专门挑选的人类胚胎干细胞的数量少,混合的未分化的野生型胚胎干细胞和菜豆凝集素,形成一个细胞沉淀。这是嫁接在免疫缺陷小鼠的肾囊下方。最初选定的人类胚胎干细胞的命运,然后可以通过免疫组化( 图 5)确定,如前呈报(9 )。这种方法提供了有价值的工具,识别和生成组织特定试剂,细胞治疗。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是支持由来自加州再生医学研究所(RC1 – 00104),公共卫生服务津贴(HL085377)从NHLBI,以及从波林基金会的礼物,以恒生银行的综合研究资助
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 240486 | Avertin | |
2,2,2-Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | Avertin | |
4-0 silk sutures | Ethicon | 641G | ||
bFGF | R&D Systems | 233FB | ||
Buprenorphine | Sigma-Aldrich | B7536 | ||
Clear-Rite 3 | Fisher | 22-046-341 | ||
Collagenase IV | Sigma-Aldrich | C5138 | ||
D-MEM | Invitrogen | 11965 | ||
DPBS | Invitrogen | 14190 | ||
Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | Kidney capsule | |
Eosin Y | Fisher | 23-245-658 | ||
Fetal Bovine Serum (Qualified) | Invitrogen | 26140-079 | ||
Flex alcohol | Fisher | 22-046344 | ||
Gill’s Hematoxylin #3 | Fisher | 22-050-204 | ||
Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
Ketoprofen | Sigma-Aldrich | K2012 | ||
KnockOut D-MEM | Invitrogen | 10829 | ||
KnockOut Serum Replacement | Invitrogen | 10828-028 | ||
L-glutamine | Invitrogen | 25020-081 | ||
MILLICELL inserts | Millipore | PICM01250 | ||
Nonessential Amino Acids | Invitrogen | 11140-050 | ||
Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
Paraffin (TissuePrep) | Fisher | 8002-74-02 | ||
Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
Permount | Fisher | SP15-100 | ||
PHA | Sigma-Aldrich | L1668 | ||
Porcine gelatin | Sigma-Aldrich | G6144 | ||
ROCK inhibitor | Calbiochem | Y-27632 | ||
SCID beige mice | Charles River | 250 | ||
Scott’s Wash | Fisher | 6697-32 | Ricca Chemicals | |
Vannas spring scissors | WPI | 14003 | Kidney capsule | |
β-mercaptoethanol | Sigma-Aldrich | M7522 |