Ориентация глубинных структур мозга с Микроинъекции для доставки лекарственных средств, вирусные векторы, или клеточных трансплантатов
Summary
В этой статье мы покажем способ сделать стеклянный капилляр иглы с 50-мкм просвет. Этот метод значительно сокращает повреждение головного мозга, снижает пассивной диффузии лекарственных препаратов и позволяет точного прицеливания в грызун мозга.
Abstract
Микроинъекции в паренхимы мозга важны процедуры доставки лекарств, вирусных векторов или клеточных трансплантатов. Поражение головного мозга, что инъекционные иглы производит во время его траектория представляет собой серьезную проблему, особенно в мозге мыши не только мозг маленький, но также иногда многократные инъекции необходимы. Мы покажем здесь метод получения стеклянных капиллярных игл с 50-мкм просвета что значительно сокращает повреждение головного мозга и позволяет точного прицеливания в грызун мозга. Этот метод позволяет доставка небольших объемах (от 20 до 100 п), уменьшает кровотечение риски и свести к минимуму пассивной диффузии препаратов в мозг паренхимы. При использовании различных размеров капилляров стекло, или изменения просвета иглы, несколько типов веществ и клеток может быть введен. Микроинъекции со стеклянной капиллярной трубке представляют собой значительное улучшение инъекционным методикам и глубокие мозга ориентации с минимальным сопутствующим ущербом в мелких грызунов.
Protocol
Discussion
Метод показал в этом видео очень полезно для доставки большинства лекарств или вирусных векторов в очень точные места в мозгу. Некоторые из основных преимуществ этого метода являются надежность ориентации точки, точность инъекций и небольшие размеры поражения мозга и повреждение пут…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ОГ-Р была поддержана КОНАСИТ с гранта (CB-2008-101476) и FRABA (686/10). AQ-H при поддержке Национального института здравоохранения, Медицинского института Говарда Хьюза, Роберта Вуда Джонсона Фонда и сотовый Мэриленд Стволовые Foundation.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Capillary glass tube | Wiretrol I | 5-000-1001 | ||
| Micropipette puller | Kopf | Model 730 | ||
| Microforge | World Precision Instruments | Model 48000 | ||
| Mineral oil | MSDS | M7700 | ||
| High-vacuum grease | Dow Corning | 05054-AB | ||
| Anesthesia: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | |||
| Heater pad | Mastex | Model 900 | ||
| Stereotactic device | Kopf | Model Kopf-900 | ||
| Surgical scalpel blade # 15 | Medi-Cut | |||
| Micro driller | Ideal Micro Drill | 67-1000 | ||
| Fine forceps | Fine Scientific Tools | |||
| 1-μL Micropipette | Rainin | |||
| Parafilm M. | ||||
| Surgical microscope | Zeiss | Vasiorkop with Contraves system | ||
| Microinjector | Narishige | Model MO-10 |
Referências
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
- Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
- Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
- Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
- Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
- Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
- Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
- Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).
