Ex vivo mechanische Belastung der Sehnen

Summary

Ein neues in vitro-System für die gleichzeitige Laden vier Sehnen in der Kultur beschrieben wird.

Abstract

Verletzungen der Sehnen (zB Handgelenk Tendinitis, epicondyltis) durch Übernutzung sind in sportlichen Aktivitäten und am Arbeitsplatz verbreitet. Die meisten sind mit gleichbleibend hohe Kraft der Hand-Aktivitäten verbunden. Die Mechanismen der zellulären und strukturellen Schäden aufgrund zyklischer Belastung sind nicht bekannt. Der Zweck dieses Videos ist es, ein neues System, das gleichzeitig geladen werden können vier Sehnen in Gewebekultur zu präsentieren. Das Video beschreibt die Methoden der sterile Gewebe Ernte und wie sich die Sehnen auf ein Spannsystem, die anschließend in Medien eingetaucht und bei 37 ° C geladen Eine Klemme befestigt ist, während der andere mit einem Linearantrieb bewegt wird. Tendon Zugkraft wird mit einer Wägezelle in Serie mit dem mobilen Klammer überwacht. Die Antriebe sind mit einem LabView Programm gesteuert. Die vier Sehnen können wiederholt mit unterschiedlichen Mustern des Ladens, Repetitionsrate, Belastungsgeschwindigkeit und Dauer geladen werden. Loading kann für ein paar Minuten bis 48 Stunden fortgesetzt werden. Am Ende der Belastung sind die Sehnen entfernt, und die Mitte der Substanz für biochemische Analysen extrahiert. Dieses System ermöglicht die Untersuchung der Auswirkungen von Be-Muster auf die Genexpression und strukturellen Veränderungen in der Sehne. Letztlich kann Mechanismen von Verletzungen durch Überbeanspruchung Studien mit den Ergebnissen angewandt zur Behandlung und Prävention sein.

Protocol

Supplement Medien CO 2-unabhängigen Medien mit fötalem Rinderserum, L-Glutamin, Antibiotika und Ascorbinsäure Aliquot 40 ml in 50 ml Zentrifugenröhrchen (1 für jede Sehne) Aliquot von 10 ml in 15 ml Zentrifugenröhrchen (1 für jede Sehne) Sterilisieren chirurgische Instrumente, Autoklaven Blatt, Pinzette und Drehmomentschlüssel in Autoklaven Sterilisieren Klemmen und Kraft Mikrometer Tipps durch Einweichen in 70% Ethanol über Nacht Ernte Sehnen aus dem hinteren Pfoten…

Discussion

Das Video zeigt ein neues System für die gleichzeitige Laden von bis zu vier Live-Sehnen in Gewebekultur. Typische loading Laufzeiten sind 2 bis 48 Stunden. Nach dem Laden werden die Sehnen entfernt und verarbeitet für die Genexpression. Das System ermöglicht die Untersuchung der Wirkung von Be-Muster auf Veränderungen in Genen, die mit degenerativen Veränderungen in der Sehne verbunden sind. Diese Experimente können einen Einblick in die Mechanismen von Verletzungen mit sich wiederholenden Belastung verbundene Dienstleistungen zu erb…

Materials

Custom 4 Linear Actuator loading system Warm water bath 50 ml tubes tendons (rabbit) Sterile media