Myocardial ऊतक इंजीनियरिंग के लिए Biologically व्युत्पन्न इंजेक्शन सामग्री का निर्माण
Summary
Decellularized ऊतक से एक इंजेक्शन मैट्रिक्स जेल की तैयारी और यह चूहे मायोकार्डियम में इंजेक्शन के लिए तरीके<em> Vivo में</em> वर्णित हैं.
Abstract
इस प्रोटोकॉल दौरे ऊतक इंजीनियरिंग अनुप्रयोगों के लिए एक इंजेक्शन के बाह्य मैट्रिक्स जेल (ईसीएम) की तैयारी के लिए तरीके प्रदान करता है है. संक्षेप में, decellularized ऊतक lyophilized है, milled, enzymatically पच, और फिर शारीरिक पीएच के लिए लाया. lyophilization ऊतकों से सब पानी सामग्री को हटा, सूखी ECM है कि एक छोटे से मिल के साथ एक ठीक पाउडर में जमीन किया जा सकता है में जिसके परिणामस्वरूप. मिलिंग के बाद, ईसीएम पाउडर पेप्सिन साथ पच जाता है एक इंजेक्शन मैट्रिक्स फार्म करने के लिए. पीएच 7.4 करने के लिए समायोजन के बाद, तरल मैट्रिक्स सामग्री मायोकार्डियम में इंजेक्ट किया जा सकता है. पिछले लक्षण वर्णन assays के परिणाम से पता चला है कि मैट्रिक्स जैल decellularized pericardial और myocardial ऊतकों से उत्पादित विविध प्रोटीन, पेप्टाइड्स और glycosaminoglycans सहित देशी ECM घटकों, को बनाए रखने. ऊतक इंजीनियरिंग के लिए इस सामग्री के उपयोग को देखते हुए, vivo लक्षण वर्णन में विशेष रूप से उपयोगी है, यहाँ, बाएं निलय में एक अंदर का इंजेक्शन प्रदर्शन के लिए एक विधि (LV) मुक्त दीवार मैट्रिक्स जेल में मेजबान प्रतिक्रिया का विश्लेषण करने के एक साधन के के रूप में प्रस्तुत किया है एक छोटे पशु मॉडल. सीने गह्वर में प्रवेश डायाफ्राम के माध्यम से प्राप्त की है और इंजेक्शन एल.वी. मुक्त दीवार में सुप्रीम से थोड़ा ऊपर किया जाता है. जैविक व्युत्पन्न पाड़ इंजेक्शन से पहले बायोटिन लेबलिंग के द्वारा visualized किया और फिर एक घोड़ा मूली peroxidase संयुग्मित neutravidin ऊतक वर्गों के साथ धुंधला हो जाना और diaminobenzidine धुंधला हो जाना (थपका) के माध्यम से visualizing कर सकते हैं. इंजेक्शन क्षेत्र के विश्लेषण भी histological और immunohistochemical धुंधला के साथ किया जा सकता है. इस तरह, पहले जांच pericardial और दौरे मैट्रिक्स जैल रेशेदार, झरझरा नेटवर्क फार्म और इंजेक्शन के क्षेत्र के भीतर वाहिनियों के गठन को बढ़ावा देने के दिखाया गया.
Protocol
Discussion
इस विधि जैविक व्युत्पन्न दौरे ऊतक इंजीनियरिंग के लिए, इंजेक्शन scaffolds की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है. हालांकि इन तरीकों के शुरू में निर्माण के लिए विकसित किए गए और एक myocardial मैट्रिक्स जेल और एक pericardial मैट्रिक्?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध में भाग एनआईएच के निदेशक नई अन्वेषक पुरस्कार कार्यक्रम, अनुदान संख्या 1-DP2 – OD004309-01 के माध्यम से चिकित्सा अनुसंधान के लिए NIH रोडमैप का हिस्सा है, द्वारा समर्थित किया गया था. SBS-एन. एक ग्रेजुएट रिसर्च फेलोशिप के लिए NSF का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents: | ||||
| Pepsin | Sigma-Aldrich | p6887-1G | Lyophilized | |
| Biotin | Thermo Scientific | 21217 | ||
| Neutravidin-HRP | Thomas Scientific | 21130 | ||
| Equipment: | ||||
| Wiley Mini Mill | Thomas Scientific | 3383L10 | ||
| Labconco Lyophilizer | Labconco, Inc | 7670520 | ||
| Surgical supplies: | ||||
| Betadine | Purdue Products, L.P. | 67618-154-16 | ||
| Lactated Ringers Solution | MWI | 003966 | ||
| KY Jelly | MWI | 28658 | ||
| Lidocaine, 2% | MWI | 17767 | ||
| Buprenorphine hydrochloride | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | 12496-0757-1 | ||
| Artificial tear ointment | Fisher | NC9860843 | ||
| Triple antibiotic ointment | Fisher | 19082795 | ||
| Isoflurane | MWI | 60307-120-25 | ||
| Otoscope | MWI | 008699 | ||
| Stop cock | MWI | 006245 | ||
| 3-0 Vicrile suture | MWI | J327H | ||
| 5-0 Proline suture | MWI | s-1173 | ||
| Reverse cutting (RC) needle | Ethicon | 8684G | ||
| Microhemostats | Fine Science Tools | 13013-14 | ||
| Rat tooth microforceps | Fine Science Tools | 11084-07 | ||
| No. 10 scalpel | Fine Science Tools | 10110-01 | ||
| Blunt scissors | Fine Science Tools | 14108-09 | ||
| Sharp, curved scissors | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Large, serrated forceps | Fine Science Tools | 1106-12 | ||
| PE160 suction tubing | BD | 427430 | ||
| Clippers | MWI | 21608 | ||
| Skin staples/stapler | Ethicon | PRR35 | ||
| General supplies: | ||||
| Stir plates | ||||
| 0.1 M HCl | ||||
| 1 M NaOH | ||||
| 10x PBS | ||||
| 1x PBS | ||||
| 70% Ethanol | ||||
| 0.1 mL syringes | ||||
| 10 mL syringe | ||||
| Q-tips | ||||
| Surgical glue | ||||
| Surgical drape | ||||
| Towel clamps | ||||
| Small hand-held vacuum |
Referências
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