Criação de micro-tecidos utilizando gel de colágeno cilíndricos, chamados módulos, que contêm células embarcados e cuja superfície é revestida com as células endoteliais.
Este protocolo descreve a fabricação de um tipo de micro-tecidos chamados de módulos. A abordagem módulo gera uniforme, tecidos escalável e vascularizada. Os módulos podem ser feitas de colágeno, bem como outros materiais gelable ou reticulável. Eles são cerca de 2 mm de comprimento e 0,7 mm de diâmetro sobre a fabricação, mas encolher de tamanho com células incorporado ou quando os módulos são revestidos com células endoteliais. Os módulos individualmente são pequenos o suficiente que as células incorporados estão dentro do limite de difusão de oxigênio e outros nutrientes, mas módulos pode ser embalado para formar tecidos maiores que são perfusable. Estes tecidos são modulares na construção, porque tipos diferentes de células pode ser incorporado em ou revestidos nos módulos antes de serem embalados para formar tecidos complexos. Há três passos principais para fazer os módulos: (1) neutralizar o colágeno e incorporação de células-lo, (2) gelificação do colágeno no tubo e corte os módulos e (3) revestimento dos módulos com células endoteliais.
Nós fabricamos diversas micro-tecidos usando módulos integrados com diferentes tipos de células 1-11. Conseguimos incorporados cardiomiócitos primária, ilhotas, células-tronco adiposas e células mesenquimais do estroma, bem como várias linhagens de células incluindo HepG2, NIH 3T3 e clone 9 células do fígado. Temos os módulos revestidos com vários tipos de células endoteliais de aorta de ratos, incluindo células endoteliais, células endoteliais da veia umbilical humana e humanos células endot…
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |