خلية الى خلية ضخم الجزيئات النقل الفحص في بلانتا الاستفادة من قصف Biolistic
Summary
ويمكن تقييم الاتجار الجزيئات بين الخلايا النباتية بالإعراب عابر بروتين fluorescently الموسومة المصالح وتحليل توزيعه داخل وبين الخلايا بواسطة المجهر مبائر.
Abstract
هنا ، نطرح على بروتوكول بسيط وسريع لكشف وتقييم مدى الخلية الى خلية النقل الجزيئات في بلانتا. في هذا البروتوكول ، وأعرب عن عابر a fluorescently الموسومة البروتين من الاهتمام في الأنسجة النباتية بعد الولادة biolistic من الحمض النووي لبناء الترميز. ثم يتم تحليل التوزيع داخل وبين الخلايا من البروتين الموسومة بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. وصفنا هذه التكنولوجيا بالتفصيل ، وتوفير خطوة بخطوة لبروتوكولات الفحص وتقييم مدى النقل بروتين متحد الجبلة في الأنواع النباتية ثلاثة thaliana Arabidopsis ، ونيكوتيانا benthamiana N. تبغ (التبغ).
Protocol
Discussion
المفتاح لنجاح تجربة النقل متحد الجبلة هو الحصول على كفاءة عالية التحول ، الذي يسمح للإنتاج مجموعات إشارة ذات دلالة إحصائية واكتشافها بسهولة. ويمكن تحقيق ذلك باستخدام أوراق تحصد من النباتات وصحية قوية ، وإعداد جزيئات الذهب المطلي بواسطة الحمض النووي إعداد نقية ومرك?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم عملنا من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة / NIGMS ، جبهة الخلاص الوطني ، وزارة الزراعة / NIFA وBARD إلى VC.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold microparticles, 1.0 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2262 | ||
| Gold microparticles, 0.6 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2263 | ||
| Spermidine | Sigma | S0266-1G | ||
| Tefzel tubing | Bio-Rad | 165-2441 | ||
| Helios cartridge preparatory station | Bio-Rad | 165-2420 | ||
| Tubing cutter | Bio-Rad | 165-2422 | ||
| Helios gene gun | Bio-Rad | 165-2432 | ||
| Helium gas regulator | Bio-Rad | 165-2413 |
Referências
- Waigmann, E., Ueki, S., Trutnyeva, K., Citovsky, V. The ins and outs of non-destructive cell-to-cell and systemic movement of plant viruses. . Crit Rev Plant Sci. 23, 195-250 (2004).
- Lucas, W. J. Plant viral movement proteins: agents for cell-to-cell trafficking of viral genomes. Virology. 344, 169-184 (2006).
- Epel, B. L. Plant viruses spread by diffusion on ER-associated movement-protein-rafts through plasmodesmata gated by viral induced host beta-1,3-glucanases. Semin Cell Dev Biol. 20, 1074-1081 (2009).
- Zambryski, P. C., Crawford, K. Plasmodesmata: gatekeepers for cell-to-cell transport of developmental signals in plants. Annu Rev Cell Dev Biol. 16, 393-421 (2000).
- Rivero-Lepinckas, L., Crist, D., Scholl, R. Growth of plants and presercation of seeds. Methods Mol Biol. 323, 3-12 (2006).
- Ueki, S., Lacroix, B., Krichevsky, A., Lazarowitz, S. G., Citovsky, V. Functional transient genetic transformation of Arabidopsis leaves by biolistic bombardment. Nat Protoc. 4, 71-77 (2009).
- Oparka, K. J. Simple, but not branched, plasmodesmata allow the nonspecific trafficking of proteins in developing tobacco leaves. Cell. 97, 743-754 (1999).
- Imlau, A., Truernit, E., Sauer, N. Cell-to-cell and long-distance trafficking of the green fluorescent protein in the phloem and symplastic unloading of the protein into sink tissues. Plant Cell. 11, 309-322 (1999).
- Gisel, A., Barella, S., Hempel, F. D., Zambryski, P. C. Temporal and spatial regulation of symplastic trafficking during development in Arabidopsis thaliana apices. Development. 126, 1879-1889 (1999).
- Kim, I., Cho, E., Crawford, K. M., Hempel, F. D., Zambryski, P. C. Cell-to-cell movement of GFP during embryogenesis and early seedling development in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci USA. 102, 2227-2231 (2005).
- Crawford, K. M., Zambryski, P. C. Non-targeted and targeted protein movement through plasmodesmata in leaves in different developmental and physiological states. Plant Physiol. 125, 1802-1812 (2001).
- Roberts, A. G. Phloem unloading in sink leaves of Nicotiana benthamiana: comparison of a fluorescent solute with a fluorescent virus. Plant Cell. 9, 1381-1396 (1997).
- Guenoune-Gelbart, D., Elbaum, M., Sagi, G., Levy, A., Epel, B. L. Tobacco mosaic virus (TMV) replicase and movement protein function synergistically in facilitating TMV spread by lateral diffusion in the plasmodesmal desmotubule of Nicotiana benthamiana. Mol Plant Microbe Interact. 21, 335-345 (2008).
