대규모 Zebrafish 기반 생체내에서 작은 분자 화면
1Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine,Vanderbilt University School of Medicine, 2Department of Pharmacology,Vanderbilt University School of Medicine, 3Vanderbilt Institute of Chemical Biology,Vanderbilt University School of Medicine, 4Research Medicine, Veterans Affairs TVHS,Vanderbilt University School of Medicine
Summary
Zebrafish는 강력한으로 등장했습니다<em> 생체내에</em표현형 기반 약물 스크린 및 화학 유전 분석> 플랫폼입니다. 여기, 우리는 zebrafish 배아를 사용하는 작은 분자의 대규모 심사 간단한 실용적인 방법을 보여줍니다.
Abstract
그들의 작은 배아 크기, 신속한 개발, 투명성, 생산력, 그리고 포유류에 수많은, 분자 및 생리 형태학의 유사성을 감안할 때, zebrafish는 강력한으로 등장했습니다<em> 생체내에</em표현형 기반 약물 스크린 및 화학 유전 분석> 플랫폼입니다. 여기, 우리는 zebrafish 배아를 사용하는 작은 분자의 대규모 심사 간단한 실용적인 방법을 보여줍니다.
Protocol
1) Zebrafish 에그 컬렉션 이전에 화학 화면의 하루 오후, 10-20 zebrafish 사육 탱크를 설정합니다. 양식업 시스템에서 물을 각각의 탱크를 채우십시오. 물고기 그물을 사용하여 각각의 사육 수조 내부 컨테이너 한 성인 남성과 1-2 성인 여성을 전송할 수 있습니다. 구분선 서로의 남성과 여성의 생선을 분리합니다. 새장을 분류하고 그들을 통해 뚜껑을 넣어. 화면의 아침, 사육 탱크에서 ?…
Discussion
zebrafish 기반 화학 화면을 계획하는 경우 특히주의가 고려에서 표현형 및 표현형의 배경 율의 견고에 지불되어야합니다. 이것은 유도 표현형 화학 진압을 위해 스크린에 특히 중요합니다. 예를 들어, transgene의 열 – 충격 유도에 의한 표현형 들어, 표현형을 유도 조건 reproducibly 정확하게 unacceptably 높은 거짓 긍정적인 요금을 피하기 위해 화면을 시작하기 전에 밖으로 매핑해야합니다. 주의 계획과, …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
- Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
- Petri dishes (10 cm).
- Plastic tea strainer.
- Wash bottle containg embryo water.
- Disposable polyethylene transfer pipettes.
- Polystyrene 96-well round-bottom assay plates (Corning COSTAR; Lowell, MA).
- Glass Pasteur pipette (Fisher Scientific).
- Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
- E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
- 12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
- 12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
- Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
- Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
- Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
- DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
- Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
- Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).
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Citar este artigo
Hao, J., Williams, C. H., Webb, M. E., Hong, C. C. Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (46), e2243, doi:10.3791/2243 (2010).