תא הקלטות שלמות של המוח של מבוגרים תסיסנית
Summary
וידאו זה מדגים את נוהל בידוד המוח כולו מן הבוגרים תסיסנית כהכנה ההקלטה מתא עצב בודד באמצעות תא רגיל הטכנולוגיה כולו. זה כולל תמונות של תאים GFP ונוירונים שכותרתו שנצפו במהלך ההקלטה.
Abstract
בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הליך לבודד את המוח כולו מן הבוגרים תסיסנית כהכנה ההקלטה מתא עצב אחד. נתחיל בתיאור פתרון לנתח ולתפוס של נשים בוגרות שימוש במחקרים שלנו. ההליך להסרת המוח כולו שלם, כולל שתי האונות אופטיים, מומחש. Dissection של קנה הנשימה שמעל מוצג גם. המוח מבודד הוא לא רק קטן אך זקוק לטיפול מיוחד בטיפול בשלב זה כדי למנוע נזק לתאי העצב, רבים מהם קרוב לפני השטח החיצוני של הרקמה. אנו מראים כיצד בעל מיוחדת שפיתחנו משמש כדי לייצב את המוח בחדר ההקלטה. Electrophysiology תקן להגדיר משמש ההקלטה מתא עצב יחיד או זוגות של נוירונים. תמונה ניאון, נצפים מבעד למיקרוסקופ הקלטה, מקו GAL4 נהיגה ביטוי של GFP (GH146) מדגים כיצד נוירונים השלכה (PNS) מזוהים במוח לחיות. תמונת מתח גבוה Nomarski מראה תצוגה של נוירון בודד כי הוא ממוקד עבור הקלטה התא כולו. כאשר המוח יוסר בהצלחה ללא נזק, רוב הנוירונים הם פעילים באופן ספונטני, יורים פוטנציאל פעולה ו / או להציג קלט סינפטי ספונטנית. זו הכנה באתרו, שבו כל תא הקלטה של נוירונים במוח המזוהה כל יכול להיות משולב עם מניפולציות גנטיות תרופתי, הוא מודל שימושי לחקר הפיזיולוגיה פלסטיות הסלולר ב CNS מבוגר.
Protocol
Discussion
הכנת מבודד המוח כולו אנו מדגימים בסרטון זה מאפשר הערכה של מנגנוני הסלולר הבסיסית רגישות והעברת סינפטיים של נוירונים שזוהו, לרבות אלה המסלולים עיבוד חוש הריח, את הבוגרים תסיסנית המוח (גו ו-O דאוד, 2006). גישה זו משלימה המחקר של הפעילות העצבית במוחם של מבוגרים תסיסנית שלם (Wilson et כל 2004),…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH NS27501 כדי DKOD. תמיכה נוספת עבור עבודה זו סופק על ידי גרנט HHMI תוכנית פרופסור כדי DKOD.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
