アダルトショウジョウバエの脳から全細胞レコーディング
Summary
このビデオでは、標準のセル全体の技術を使用して単一ニューロンから記録するための準備のために成人のショウジョウバエから全脳を単離するための手順を示しています。それは、記録中に表示したGFP標識された細胞と神経細胞のイメージが含まれます。
Abstract
このビデオでは、我々は、単一のニューロンからの記録の準備のために成人のショウジョウバエから全脳を単離するための手順を示しています。我々は我々の研究で使用されている成人女性の解剖ソリューションとキャプチャを記述することから始めます。 、両方の光のローブを含む、脳全体をそのまま削除するための手順が示されている。上を覆う気管の解剖も表示されます。分離された脳は小さくはないだけですが、神経細胞の損傷を防ぐために、この段階では取り扱いに特別な注意が必要、その多くは、組織の外表面に近づいています。私達は私達が開発した特殊なホルダーが録音室内の脳を安定させるために使用される方法を示します。標準的な電気生理学セットまでは、ニューロンの単一ニューロンまたはペアからレコーディングに使用されます。 GFPの発現を駆動するGAL4ラインから録音顕微鏡を通して見た蛍光画像は、、（GH146）投射ニューロン（PNS）はライブで脳内で識別される方法を示します。ハイパワーノマルスキー画像は、全細胞記録を対象とされている単一のニューロンのビューを示しています。脳が正常に損傷することなく削除されると、ニューロンの大半は、活動電位を焼成及び/または自発的なシナプス入力を示す、自発的にアクティブになります。脳全体で特定された神経細胞の全細胞記録は遺伝的および薬理学的操作と組み合わせることができる現場準備、でこれは、成体中枢神経系の細胞生理と可塑性を探索するための有用なモデルです。
Protocol
Discussion
我々はこのビデオで説明する分離された全脳標本は成体ショウジョウバエの脳（区とOダウド、2006）における嗅覚の処理経路のもの、を含む、同定されたニューロン、の興奮性とシナプス伝達の根底にある細胞メカニズムの評価を可能にする。このアプローチは、そのまま大人ショウジョウバエ（Wilsonら全2004）の脳内の神経活動の研究に相補的である、ほぼ同じ方法で、哺乳類の脳スライスの神経細胞から?…
Acknowledgements
この作品は、DKODにNIHの助成金NS27501によってサポートされていました。この作業のための追加サポートがDKODへHHMI教授プログラムの助成によって提供されていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
