वयस्क ड्रोसोफिला के मस्तिष्क से पूरे सेल रिकॉर्डिंग
Summary
इस वीडियो वयस्क ड्रोसोफिला से एक मानक पूरे सेल प्रौद्योगिकी का उपयोग न्यूरॉन्स से रिकॉर्डिंग के लिए तैयार करने में पूरे दिमाग अलग करने के लिए प्रक्रिया को दर्शाता है. यह GFP लेबल कोशिकाओं और न्यूरॉन्स रिकॉर्डिंग के दौरान देखा की छवियों शामिल हैं.
Abstract
इस वीडियो में, हम वयस्क ड्रोसोफिला से एकल न्यूरॉन्स से रिकॉर्डिंग के लिए तैयार करने में पूरे दिमाग अलग करने के लिए प्रक्रिया प्रदर्शित करता है. हम विदारक समाधान और हमारे अध्ययन में इस्तेमाल किया वयस्क महिलाओं का कब्जा वर्णन द्वारा शुरू करते हैं. पूरे मस्तिष्क को अक्षुण्ण निकालने, दोनों ऑप्टिक lobes सहित, के लिए प्रक्रिया सचित्र है. Overlying ट्रेकिआ के विच्छेदन भी दिखाया गया है. पृथक मस्तिष्क न केवल छोटा है, लेकिन इस स्तर पर निपटने के लिए न्यूरॉन्स को नुकसान को रोकने में विशेष देखभाल की जरूरत है, जिनमें से कई ऊतक की बाहरी सतह के करीब हैं. हम बताते हैं कि हम विकसित एक विशेष धारक रिकार्डिंग कक्ष में मस्तिष्क को स्थिर करने के लिए प्रयोग किया जाता है. सेट एक मानक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी एकल न्यूरॉन्स या जोड़े से न्यूरॉन्स की रिकॉर्डिंग के लिए प्रयोग किया जाता है. एक फ्लोरोसेंट छवि, रिकॉर्डिंग माइक्रोस्कोप के माध्यम से एक GAL4 (GH146) दिखाता है कि कैसे प्रक्षेपण न्यूरॉन्स (पीएन) रहते हैं मस्तिष्क में पहचाने जाते हैं GFP अभिव्यक्ति ड्राइविंग लाइन से देखा. एक उच्च शक्ति Nomarski छवि है कि पूरे सेल रिकॉर्डिंग के लिए लक्षित किया जा रहा है एक न्यूरॉन के एक दृश्य दिखाता है. जब सफलतापूर्वक मस्तिष्क क्षति के बिना हटा दिया जाता है, न्यूरॉन्स के बहुमत अनायास सक्रिय हैं, कार्रवाई क्षमता और / या सहज synaptic इनपुट प्रदर्शन फायरिंग. सीटू की तैयारी, जो पूरे दिमाग में न्यूरॉन्स की पहचान के पूरे सेल रिकॉर्डिंग आनुवंशिक और औषधीय जोड़तोड़ के साथ संयुक्त किया जा सकता है है में यह वयस्क CNS में सेलुलर फिजियोलॉजी और plasticity की खोज के लिए एक उपयोगी मॉडल है.
Protocol
Discussion
पृथक पूरे मस्तिष्क तैयारी हम इस वीडियो में उदाहरण देकर स्पष्ट करना सेलुलर excitability और घ्राण प्रसंस्करण रास्ते में वयस्क ड्रोसोफिला मस्तिष्क (गुजरात और हे Dowd, 2006) में, उन सहित पहचान की न्यूरॉन्स, में synaptic प्रसारण अंतर…
Acknowledgements
यह काम एक NIH अनुदान DKOD NS27501 द्वारा समर्थित किया गया. इस काम के लिए अतिरिक्त समर्थन एक HHMI प्रोफेसर कार्यक्रम DKOD अनुदान द्वारा प्रदान की गई थी.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
