Helcells Inspelningar från hjärnan hos vuxna Drosophila

Summary

Denna video demonstrerar förfarandet för att isolera hela hjärnor från vuxna Drosophila för att förbereda inspelning från enskilda nervceller med hjälp av vanliga hela cellteknologi. Den innehåller bilder av GFP märkta celler och neuroner visade under inspelningen.

Abstract

I denna video visar vi förfarandet för att isolera hela hjärnor från vuxna Drosophila för att förbereda inspelning från enstaka nervceller. Vi börjar med att beskriva dissekera lösningen och tillfångatagandet av den vuxna honor som används i våra studier. Förfarandet för att ta bort hela hjärnan intakt, inklusive både optiska loberna, illustreras. Dissekering av den överliggande luftstrupen visas också. De isolerade Hjärnan är inte bara liten, men behöver särskild vård i hanteringen i detta skede för att förhindra skador på nervceller, av vilka många ligger nära den yttre ytan av vävnaden. Vi visar hur en speciell hållare vi utvecklat används för att stabilisera hjärnan i inspelningen kammaren. En standard elektrofysiologi inrättat används för inspelning från enstaka nervceller eller par av nervceller. En fluorescerande bild, sedd genom inspelning mikroskop, från en GAL4 linje körning GFP uttryck (GH146) illustrerar hur projektion neuron (PNS) identifieras i den levande hjärnan. En hög effekt Nomarski bild visar en vy av en enda neuron som blir måltavla för hela cellen inspelning. När hjärnan är framgångsrikt bort utan att skada, de flesta av nervceller är spontant aktiva, bränning aktionspotentialer och / eller uppvisar spontan synaptisk input. Detta på plats beredning, i vilken helcells inspelning av identifierade nervceller i hela hjärnan kan kombineras med genetiska och farmakologiska manipulationer, är en användbar modell för att utforska cellulär fysiologi och plasticitet i den vuxna CNS.

Protocol

I. dissektion av hjärnor från vuxna flyga Placera en liten droppe (~ 100 l) av dissekera lösning i centrum av en 35 mm petriskål. Catch vuxen hona med aspirator. Enligt dissekera mikroskop, använder två kanyler att halshugga flugan. Placera huvudet i en liten droppe dissekera saltlösning (med papain läggs till) i en petriskål. Placera huvudet med med SNABEL vänd ner i skålen. Håll nagelbanden täcker vänstra förening ögat med nål 1. Gör ett diagonalt sni…

Discussion

De isolerade hela hjärnan förberedelser illustrerar vi i den här videon gör bedömning av cellulära mekanismer som ligger bakom retbarhet och synaptisk överföring i identifierade nervceller, inklusive de i den lukt bearbetning vägar, i den vuxna Drosophila hjärnan (Gu och O Dowd, 2006). Denna metod är ett komplement till studier av neuronal aktivitet i hjärnan av intakt vuxna Drosophila (Wilson et alla 2004), ungefär på samma sätt inspelningar från nervceller i ett däggdjur hjärna skiva är ett komplement till inspelningar …

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
#5 Foceps	Tool	FST by DUMONT	No. 11251-10	Be careful, never damage the fine tips of forceps
Papain	Reagent	Worthington	3126	20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine
Dissecting microscope	SMZ-2B Model:C-PS	Nikon		Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle
Needle & Syringe		PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co	305175 & 309602	Cheap and durable
Upright microscope	Axioskop2 FS plus	Zeiss		Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp
Patch clamp amplifier	200 B	Molecular device
Digidata D-A converter	1322A	Molecular device