Un protocole optimisé pour l'isolement des cellules souches de la glande salivaire de souris est décrite. La méthode emploie digestion enzymatique et mécanique, et permet d'isoler les cellules contenant salispheres avec des caractéristiques de cellules souches.
Mature glandes salivaires d'origine à la fois humains et de souris comprendre un minimum de cinq types de cellules, chacune d'elles facilite la production et l'excrétion de salive dans la cavité buccale. Cellules acineuses séreuses et muqueuses sont les protéines et les muqueuses des usines produisant de la glande, respectivement, et de représenter l'origine de la production de salive. Une fois synthétisés, les différentes enzymatiques et d'autres composants protéiques de la salive sont sécrétées par une série de cellules canalaires portant épithéliales de type morphologique, jusqu'à l'expulsion éventuelle de la salive à travers un conduit d'importants dans la cavité de la bouche. La composition de la salive est également modifié par les cellules canalaires pendant ce processus.
Dans la manifestation de maladies telles que le syndrome de Sjögren, et dans certaines situations cliniques telles que la radiothérapie pour les cancers de la tête et du cou, la production de salive par les glandes est considérablement réduite 1,2. La xérostomie qui en résulte, une sensation subjective de bouche sèche, affecte non seulement la capacité du patient à avaler et à parler, mais encourage également le développement de la carie dentaire et peut être socialement invalidante pour celui qui souffre.
La restauration de la production de salive dans les conditions ci-dessus cliniques représente donc un besoin clinique non satisfait, et comme tel, plusieurs études ont démontré la capacité de régénération des glandes salivaires 3-5. Suite à l'isolement des cellules souches, comme les populations de cellules de différents tissus au sein de la souris et le corps humains 6-8, nous avons montré en utilisant la méthode décrite que les cellules souches isolées à partir de glandes salivaires de souris peut être utilisée pour sauver la production de salive dans salivaires irradiées glandes 9,10. Cette découverte ouvre la voie pour le développement de base de cellules souches thérapies pour le traitement de la xérostomie conditions chez les humains, et aussi pour l'exploration de la glande salivaire comme un microenvironnement des cellules contenant des multipotentes auto-renouvellement des capacités.
La méthode de culture de tissus décrit ici représente un protocole reproductible pour l'isolement des cellules souches contenant salispheres des glandes salivaires de souris. Les études utilisant des cellules isolées de cette manière ont mis en évidence la capacité de régénération de la glande salivaire cellules souches 9. La transplantation d'une centaine de c-kit + cellules dérivées de la salispheres induite récupération fonctionnelle des glandes salivaires de souris irradiées. Ces données sont intéressantes et fournissent un point de départ pour l'enquête sur les cellules souches pour la thérapie basée xérostomie. Beaucoup de pistes restent à explorer cependant, y compris le profil d'expression marqueur protéique complète des cellules souches, la capacité des glandes sous-maxillaires pour sauver la fonction des glandes parotides irradiés salivaires et vice versa, et la caractérisation de la putatifs dans une niche de cellules souches in vivo des les cellules. Finalement, la traduction de ce protocole d'échantillons de tissus humains et le potentiel ultérieur pour le traitement de la xérostomie chez les patients humains en utilisant des cellules isolées est l'application la plus excitante de la méthode décrite.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |