एयर तरल इंटरफेस पर माउस श्वसन उपकला कोशिकाओं और प्रायोगिक सिगरेट धूम्रपान करने के लिए एक्सपोजर के अलगाव
Summary
फेफड़े के उपकला कोशिकाओं को चूहों के श्वसन पथ से अलग किया जा सकता है और विभेदित श्वसन उपकला के एक मॉडल के रूप में हवा तरल इंटरफेस पर सभ्य है. संवर्धन, अलग और मुख्यधारा सिगरेट के धुएं के इन कोशिकाओं को उजागर करने के लिए एक प्रोटोकॉल में वर्णित है, क्रम में इस पर्यावरण विष आणविक प्रतिक्रियाओं का अध्ययन.
Abstract
फेफड़े के उपकला कोशिकाओं को चूहों के श्वसन पथ और विभेदित श्वसन उपकला के एक मॉडल के रूप में हवा तरल इंटरफेस (अली) में सभ्य से अलग किया जा सकता है. अलग और मुख्यधारा सिगरेट का धुआँ (सीएस) के लिए इन कोशिकाओं को उजागर करने के लिए एक प्रोटोकॉल में वर्णित है, क्रम में सीएस जोखिम को उपकला कोशिका प्रतिक्रियाओं का अध्ययन. माउस ट्रेकिआ, हवा तरल इंटरफ़ेस (अली) के रूप में पूरी तरह विभेदित उपकला कोशिकाओं पर इन कोशिकाओं के संवर्धन, और कैलिब्रेटेड मुख्यधारा सीएस की संस्कृति में इन कोशिकाओं को प्रसव से airway उपकला कोशिकाओं के अलगाव: प्रोटोकॉल तीन भागों से होते हैं. अली संस्कृति प्रणाली है कि और अधिक बारीकी से उनके साधारण तरल संस्कृति प्रणालियों की तुलना में शारीरिक सेटिंग समान शर्तों के तहत सांस epithelia की संस्कृति की अनुमति देता है. आणविक और फेफड़ों सीएस जोखिम के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं का अध्ययन मानव स्वास्थ्य पर पर्यावरण वायु प्रदूषण के प्रभाव को समझने का एक महत्वपूर्ण घटक है. इस क्षेत्र में अनुसंधान के निष्कर्षों को अंततः क्रोनिक प्रतिरोधी फुफ्फुसीय रोग (सीओपीडी), और अन्य तम्बाकू से संबंधित रोग है, जो प्रमुख वैश्विक स्वास्थ्य समस्याओं का प्रतिनिधित्व करते हैं के एटियलजि समझ की दिशा में योगदान कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
माउस tracheal उपकला कोशिकाओं के अलगाव का वर्णन प्रोटोकॉल तुम एट अल के प्रोटोकॉल से अनुकूल है. 1, और दूसरों को 2-3 से संशोधनों के साथ. किसी भी प्रोटोकॉल का वर्णन सेल isolations के साथ के रूप में, सबसे महत्व…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम तकनीकी सहायता और डॉ. शिवराज त्यागी के लिए बहुमूल्य विशेषज्ञता के लिए Emeka Ifedigbo धन्यवाद. हम भी माइक्रोस्कोपी के साथ सहायता के लिए हार्वर्ड NeuroDiscovery केंद्र धन्यवाद. इस काम के हिस्से में एक अमेरिकन हार्ट हिलैरे, लाम, और NIH अनुदान, R01 HL60234, R01 HL55330, R01-HL079904 AMK चोई के लिए सम्मानित किया अनुदान 09PRE2250120 predoctoral एसोसिएशन द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ham’s F12 Medium 1X | Cellgro | MT-10-080-CM | With L-glutamine | |
| Pen/strep | Lonza | 17-602E | ||
| Pronase | Roche | 10165921001 | Streptomyces griseus | |
| Collagen I | BD biosciences | 354236 | From rat tail | |
| Acetic Acid | Sigma | 338826-25 | ||
| DNaseI | Sigma | DN25-100MG | From Bovine Pancreas | |
| Bovine Serum Albumin | Fisher Scientific | BP1605-100 | Fraction V | |
| Retinoic Acid | Retinoic Acid | R265-50MG | ||
| Hank’s Balanced Salt Solution | Gibco | 14175 | Without Ca++ or Mg++ | |
| DMEM-F12 | Cellgro | MT-15-090-CM | Without L-Glutamine or HEPES | |
| HEPES, 1M in H2O | Sigma | 83264-100ML | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513-100ML | 200 mM | |
| Amphotericin B (Fungizone) | Fisher Scientific | 1672346 | ||
| Insulin | Sigma | 16634-50MG | Bovine Pancreas | |
| Apo-transferrin (human) | Sigma | T1147-100MG | ||
| Cholera toxin | Sigma | C8052 | Vibrio Cholerae | |
| Epidermal growth factor | BD Biosciences | 354001 | Mouse | |
| Bovine pituitary Extract | BD Biosciences | 354123 | ||
| NuSerum | BD Biosciences | 355100 | ||
| Transwell | Corning Costar | 3401 | 12 mm, 0.4 mm Pore Polycarbonate |
|
| Primaria 100 mm culture dish | Falcon | 353803 | ||
| Pallflex membrane | Pall Life Sciences | EMFAB TX40H120-WW | ||
| Smoking Machine | EMI Services | ATCSALI-1 | see Footnote* |
*The cigarette smoking machine is a custom designed and fabricated 14″x14″x20″ Dual chambered and water jacketed light tint clear proof 1/2″ thick polycarbonate Lexan chamber for cigarette smoke exposure with temperature controlled, water level sensor controlled shut off system. A cigarette smoking/puffing unit is installed for a variable cigarette puffing rates. When the unit is in use, it mimics an incubator in the sense that the temperature, humidity and carbon dioxide are controlled in the system. The system includes: (I) a customized dual chamber/water jacketed unit that maintains a controlled environment for tissue culture experiments. (II) A digital heavy duty, high precision dual pump water temperature circulator system with water level sensor and temperature control (III) A cigarette smoking unit with puffing pump. (IV) A pump cycle sensor control rate cycler (IV) A Stainless steel high precision in-Line filter holder. (V) A Detachable lid mounted 11/2″ size axial uniformity cigarette smoke mixing fan. (VI) A medium size water bath with mounting bracket for the water circulator. (VII) A 1/2′ thick Plexiglas tray with brackets for the puff pump and holder for cigarette ash collector.
This machine as described can be substituted with similar commercially-available smoking machines such as the kind available from TSE systems (www.tse-systems.com).
Referências
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