Myo यांत्रिक पृथक कंकाल की मांसपेशी का विश्लेषण
Summary
आकलन करने के लिए<em> Vivo में</em> मांसपेशियों की बीमारी के लिए उपचारात्मक उपायों का प्रभाव, विधियों बल और इलाज की मांसपेशी में पीढ़ी fatigability quantitate जरूरत है. हम explanted माउस hindlimb मांसपेशियों में myo यांत्रिक गुणों का मूल्यांकन करने के लिए एक दृष्टिकोण विस्तार. इस विश्लेषण के लिए पेशी समारोह पर आनुवंशिक संशोधन, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मांसपेशियों की बीमारी के माउस मॉडल में चिकित्सा की तुलना के प्रभाव quantitating एक मजबूत दृष्टिकोण प्रदान करता है.
Abstract
मांसपेशियों 1,2,3 रोग के इलाज के लिए उपचारात्मक उपायों के vivo प्रभाव में आकलन करने के लिए, मात्रात्मक पद्धतियों की जरूरत है कि उपाय बल और इलाज की मांसपेशी में पीढ़ी fatigability. हम हौसले explanted माउस से hindlimb मांसपेशियों में myo यांत्रिक गुणों का मूल्यांकन करने के लिए एक विस्तृत दृष्टिकोण का वर्णन. हम माउस extensor digitorum longus मांसपेशियों के atraumatic फसल का वर्णन, एक मांसपेशी पट्टी (820MS मॉडल, डैनिश myo प्रौद्योगिकी) myograph में पेशी बढ़ते, और अधिक से अधिक चिकोटी और धनुस्तंभीय तनाव, संकुचन समय, और आधे विश्राम का समय की माप, एक का उपयोग वर्ग पल्स उत्तेजक औधधि (S48 मॉडल, घास टेक्नोलॉजीज). इन माप का उपयोग करना, हम विशिष्ट चिकोटी और धनुस्तंभीय तनाव मांसपेशी पार के अनुभागीय, चिकोटी धनुस्तंभीय तनाव अनुपात, रिश्ते बल आवृत्ति वक्र और कम आवृत्ति थकान वक्र 4 क्षेत्र के लिए सामान्यीकृत की गणना प्रदर्शित करता है. इस विश्लेषण मांसपेशियों 1,2,3,5 रोग के माउस मॉडल में उपचारात्मक उपायों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मांसपेशी समारोह 6,7,8,9 पर आनुवंशिक संशोधन के प्रभाव की तुलना के बीच मात्रात्मक तुलना के लिए एक तरीका प्रदान करता है .
Protocol
Discussion
हम explanted माउस से hindlimb मांसपेशी में myo यांत्रिक गुणों का मूल्यांकन करने के लिए एक विस्तृत दृष्टिकोण का वर्णन. EDL, जबकि अधिक करने के लिए अपनी tibialis पूर्वकाल मांसपेशी पीछे पीछे स्थिति की वजह से काटना मुश्किल है, क्योंकि इसके प्रमुख नसदार संलग्नक tibialis टखने और घुटने के जोड़ों के लिए पूर्वकाल से मूल्यांकन करने के लिए आसान है. इन tendons मांसपेशियों पट्टी myograph में बढ़ते की सुविधा. इसके विपरीत, अधिक आसानी से पहुँचा tibialis पूर्वकाल संयुक्त घुटने पर एक व्यापक, लगभग atendinous लगाव है, यह असाधारण मुश्किल मांसपेशियों समझौता किए बिना दोनों टुकड़े करना करने के लिए, और myograph में सुरक्षित माउंट बना. हम भी बाहर बिंदु है कि तेजी से शारीरिक बफर और तापमान में एक oxygenated स्नान में पेशी बढ़ते मांसपेशियों के यांत्रिक गुणों के संरक्षण के लिए आवश्यक है. हमने पाया है कि हम 30 मिनट के लिए मांसपेशियों के जवाब में महत्वपूर्ण बदलाव के बिना इन शर्तों के तहत इस विश्लेषण को दोहरा सकते हैं. अंत में, यह आवश्यक है कि मांसपेशी फाइबर विच्छेदन और बढ़ते प्रक्रियाओं के दौरान छुआ तक नहीं हो सकता है, के रूप में इस मांसपेशी समारोह पर प्रतिकूल प्रभाव है, और myo यांत्रिक बल के मूल्यवान समझना में परिणाम कर सकते हैं. इन प्रक्रियाओं का पालन करके, इस विश्लेषण मांसपेशी समारोह 6,7,8,9 पर आनुवंशिक संशोधन के प्रभाव के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मांसपेशियों 1,2,3,5 रोग के माउस मॉडल में उपचारात्मक उपायों के बीच तुलना का मूल्यांकन एक मजबूत मात्रात्मक दृष्टिकोण प्रदान करता है .
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एक सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा NHLBI से PEO (HL086513) अनुदान, और पुनर्योजी (RC1 00,104) चिकित्सा, एक सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा NHLBI से अनुदान (HL085377) के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट से एक व्यापक अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, और एक उपहार Pollin फाउंडेशन से HSB
अनुसूचित जाति पुनर्योजी चिकित्सा पुल के लिए कैलिफोर्निया संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था करने के लिए स्टेम सेल अनुसंधान सैन फ्रांसिस्को स्टेट यूनिवर्सिटी के लिए पुरस्कार (TB1 01,194).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
| 5-0 silk sutures | Oasis | MV682 | General surgery | |
| Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | General surgery | |
| Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
| Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
| Lab Chart software | ADInstruments | Version 7 | Data analysis | |
| Muscle Strip Myograph | DMT | 820MS | Tension transduction | |
| Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
| Oscilloscope | EZ | OS-5020 | Tension stimulation | |
| Pentobarbital, sodium salt | Sigma | P3761 | Euthanasia | |
| PowerLab | ADInstruments | 8/30 | Data acquisition | |
| Square Pulse Stimulator | Grass Tech. | S48 | Tension stimulation | |
| Vannas spring scissors | WPI | 14003 | General surgery |
Solutions and Media
Lactated Ringer’s solution
- 100 mM NaCl
- 30 mM CH3CH(OH)COONa (sodium lactate)
- 4 mM KCl
- 1 mM CaCl2 2H2O (calcium chloride dihydrate)
- adjust pH to 6.75
Krebs Henseleit solution
- 118 mM NaCl
- 4.7 mM KCl
- 1.25 mM CaCl2
- 1.2 mM MgCl2
- 1.2 mM KH2PO4
- 25 mM NaHCO3
- 11 mM glucose
- adjust pH to 7.2-7.4 by equilibrating with O2/CO2 (95%/5%) gas
Pentobarbital
- 5 mg/ mL working solution in sterile water
Referências
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