För att bedöma<em> In vivo</em> Effekterna av terapeutiska interventioner för muskelsjukdom, är metoder för att kvantifiera styrkebidrag och fatigability hos behandlade muskeln. Vi detalj en strategi för att bedöma myo-mekaniska egenskaper i explanterade mus bakdelen muskler. Denna analys ger en robust metod för kvantifiering av effekterna av genetisk modifiering på muskelfunktion, samt jämförelser av behandlingar i musmodeller av muskelsjukdom.
För att bedöma in vivo effekter av terapeutiska ingrepp för behandling av muskelsjukdom 1,2,3, är kvantitativa metoder behövs som mäter krafter generation och fatigability hos behandlade muskeln. Vi beskriver en detaljerad strategi för att bedöma myo-mekaniska egenskaperna i färsk explanterade bakdelen muskel från musen. Vi beskriver atraumatisk skörden av musen extensor digitorum longus muskler, montering muskeln i en muskel band myograph (Modell 820MS, danska Myo Technology), och mätning av maximal rycka och tetanic spänning, kontraktion tid och halv-relaxationstiden, med hjälp av en fyrkantig puls stimulator (Modell S48, Gräs Technologies). Med hjälp av dessa mätningar, visar vi beräkning av specifika rycka och tetanic spänningar normaliseras till muskel tvärsnittsarea, den rycka till tetanic spänning förhållande, kraft-frekvens relation kurvan och låg frekvens trötthet kurva 4. Denna analys ger en metod för kvantitativa jämförelser mellan terapeutiska ingrepp i musmodeller av muskelsjukdom 1,2,3,5, samt jämförelse av effekterna av genetisk modifiering på muskelfunktionen 6,7,8,9.
Vi beskriver en detaljerad strategi för att bedöma myo-mekaniska egenskaper i explanterade bakdelen muskel från musen. EDL, medan svårare att dissekera på grund av dess bakre position bakom tibialis anterior muskeln är lättare att utvärdera än tibialis anterior på grund av dess framträdande tendinous bilagor till ankeln och knäledsartros. Dessa senor underlätta montering i muskeln band myograph. Däremot har de mer lättillgängliga tibialis anterior en bred, nästan atendinous anknytning vid knäleden, vilket gör det oerhört svårt att både dissekera utan att kompromissa med muskler, och montera säkert i myograph. Vi påpekar också att snabbt montage muskeln i en syresatt bad i fysiologisk buffert och temperatur är avgörande för att bevara muskelns mekaniska egenskaper. Vi har funnit att vi kan upprepa den här analysen i upp till 30 minuter utan signifikanta förändringar i muskler svar under dessa förhållanden. Slutligen är det viktigt att muskelfibrerna inte vidröras under dissekering och montage, eftersom detta kan få negativa effekter på muskelfunktion, och resultera i underskattning av myo-mekanisk kraft. Genom att följa dessa procedurer ger denna analys en robust kvantitativ metod för att utvärdera effekterna av genetisk modifiering på muskelfunktion 6,7,8,9, liksom jämförelse mellan terapeutiska ingrepp i musmodeller av muskelsjukdom 1,2,3,5 .
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av ett Public Health Service Grant (HL086513) från NHLBI till PEO, och ett omfattande forskningsanslag från California Institute för regenerativ medicin (RC1-00104), en Public Health Service Grant (HL085377) från NHLBI, och en gåva från Pollin Foundation för HSB
SC fick stöd av en California Institute för regenerativ medicin Bridges to Stem Award Cell Research (TB1-01.194) till San Francisco State University.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
5-0 silk sutures | Oasis | MV682 | General surgery | |
Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | General surgery | |
Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
Lab Chart software | ADInstruments | Version 7 | Data analysis | |
Muscle Strip Myograph | DMT | 820MS | Tension transduction | |
Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
Oscilloscope | EZ | OS-5020 | Tension stimulation | |
Pentobarbital, sodium salt | Sigma | P3761 | Euthanasia | |
PowerLab | ADInstruments | 8/30 | Data acquisition | |
Square Pulse Stimulator | Grass Tech. | S48 | Tension stimulation | |
Vannas spring scissors | WPI | 14003 | General surgery |
Solutions and Media
Lactated Ringer’s solution
Krebs Henseleit solution
Pentobarbital