人类神经干细胞计数
Summary
知识是需要许多组织培养操作活菌的确切人数。本协议描述了如何区分活细胞和死细胞和使用hemacytometer量化细胞。虽然它描述了人类神经干/前体细胞（hNSPCs）计数，它可用于其他类型的细胞。
Abstract
活细胞中的一个细胞悬液体积的确切数目的知识是必需的，如电镀细胞免疫细胞化学或细胞转染，许多日常的组织文化的操作。本协议描述了一个简单，快速的方法，区分活细胞和死细胞和量化的细胞浓度和细胞总数使用hemacytometer。这个过程首先需要分离从表面生长的细胞，他们在媒体resuspending。下一步，在台盼蓝（理想的浓度，将给予20-50％象限细胞）溶液稀释细胞，放在hemacytometer。最后，在随机选择的几个象限平均活菌计数，除以一个1 毫米 2象限（0.1μL），乘以稀释倍数的体积平均给每L.细胞的数量μL总体积乘以该细胞浓度，细胞总数。本协议描述了人类神经干/前体细胞（hNSPCs）计数，但也可以用于许多其他类型的细胞。
Protocol
传代人类神经干细胞 注 ：请参阅的传代人类神经干细胞 如何分离和悬浮细胞的文章 。 https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 准备用于计数细胞悬液将25μL0.4％台盼蓝溶液和20μL细胞介质到Eppendorf管。 悬浮轻轻拍打管包含在媒体的?…
Discussion
本协议描述了一个简单和快速的方式，各种涉及细胞的实验，以确定细胞浓度。使用在3D中描述的快捷方式，可以快速，准确地判断细胞浓度和细胞总数在给定的体积。
Acknowledgements
作者要感谢在儿童医院，奥兰治县提供hNSPC文化研究所的菲利普H ·施瓦茨博士国家人类神经干细胞资源。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
Referências
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
Citar este artigo
Marchenko, S., Flanagan, L. Counting Human Neural Stem Cells. J. Vis. Exp. (7), e262, doi:10.3791/262 (2007).