الركض الخلايا الجذعية العصبية البشرية
Summary
القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يسمح للتحقيق في فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية واستكشاف التنمية العصبية البشرية. هذا البروتوكول يمثل طريقة زراعة وhNSPCs الركض وتأمل في زيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية.
Abstract
القدرة على التعامل مع الإنسان الجذعية العصبية / السلائف الخلايا (hNSPCs) في المختبر يوفر وسيلة لتحقيق فائدتها وزرع الخلايا لأغراض علاجية وكذلك لاستكشاف العديد من العمليات الأساسية للتنمية البشرية وعلم الأمراض العصبية. هذا البروتوكول يمثل طريقة بسيطة للزراعة وhNSPCs الركض وتأمل في توحيد هذه التقنية وزيادة استنساخ الإنسان من أبحاث الخلايا الجذعية. وقد عزل hNSPCs نستخدمها من جثي قشرات الدماغ بعد الولادة من قبل الإنسان الجذعية العصبية الوطنية الموارد ونمت الخلايا والثقافات ملتصقة على قوارير مغلفة مع فبرونيكتين (بالمر وآخرون ، 2001 ؛. شوارتز وآخرون ، 2003). نحن ثقافتنا hNSPCs في DMEM : F12 المصل خالية من وسائل الإعلام تستكمل مع EGF ، جمعية جيل المستقبل ، ولهم والمرور PDGF 01:02 تقريبا كل سبعة أيام. باستخدام هذه الظروف ، فإن الغالبية العظمى من الخلايا في ثقافة الحفاظ على التشكل الثنائي القطب وأعرب عن علامات المفاضلة الخلايا الجذعية العصبية (مثل nestin وsox2).
Protocol
Discussion
لقد وجدنا أن هذا البروتوكول يتيح الثقافات موثوق hNSPCs. أحد العوامل الحاسمة لخلايانا هو أنها تحتاج إلى أن تبقى ، لأن الحضارات كثيفة الى حد ما ولا يمكن passaged إلى النقطة التي كانت الخلايا متفرق. في أيدينا ، والثقافات متفرق تنمو ببطء شديد أو الكف تماما عن الانقسام. لهذا السبب ، فإننا عا?…
Acknowledgements
الكتاب الامتنان الدكتور فيليب H. شوارتز من العصبية الوطنية الجذعية البشرية الموارد خلية في مستشفى للأطفال ، أورانج كاونتي معهد البحوث لتوفير التعليم الأولي وhNSPCs في زراعة بهم.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
| DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
| FGF, human basic recombinant | Reagent | Peprotech | 100-18B | |
| PDGF-AB | Reagent | Peprotech | 100-00AB | |
| EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm | ||
| Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
Referências
- Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).
- Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture. Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).
- Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. Cell culture. Progenitor cells from human brain after death. Nature. 411, 42-43 (2001).
- Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O’Dowd, D. K., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
