Pases células madre neurales humanas
Summary
La capacidad de manipular humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs) in vitro permite investigar su utilidad como los trasplantes de células con fines terapéuticos y para explorar el desarrollo neuronal humano. Este protocolo presenta un método de cultivo y hNSPCs pases con la esperanza de la reproducibilidad de cada vez mayor de la investigación con células madre humanas.
Abstract
La capacidad de manipular humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs) in vitro constituye un medio para investigar su utilidad como los trasplantes de células con fines terapéuticos, así como para explorar muchos de los procesos fundamentales del desarrollo humano y la patología neuronal. Este protocolo presenta un método simple de cultivo y hNSPCs pases con la esperanza de la normalización de esta técnica y el aumento de la reproducibilidad de la investigación con células madre humanas. El hNSPCs usamos fueron aislados de cadáveres corteza cerebral postnatal por el Instituto Nacional de Recursos Humanos de las células madre neurales y crecido como adherente culturas en frascos recubiertas con fibronectina (Palmer et al, 2001;.. Schwartz et al, 2003). Nosotros la cultura de nuestro hNSPCs en DMEM: F12 medio libre de suero suplementado con EGF, FGF y PDGF y el paso de las 1:02 aproximadamente cada siete días. Usando estas condiciones, la mayoría de las células en el cultivo mantienen una morfología bipolar y expresan marcadores de células madre indiferenciadas neural (como la nestina y Sox2).
Protocol
Discussion
Hemos encontrado que este protocolo ofrece culturas fiable de hNSPCs. Un factor crítico para nuestras células es que tienen que ser lo bastante denso y las culturas no pueden ser pasados al punto de que las células son escasas. En nuestras manos, culturas escasa crecen muy lentamente o desaparecen completamente división. Por esta razón, se suelen dividir nuestras culturas 1:2 o 1:3 cuando la cultura es extremadamente denso. Revestimiento de la superficie de una placa de cultivo con fibronectina es importante, ya que promueve la u…
Acknowledgements
Los autores agradecen el Dr. Philip H. Schwartz de la Comisión Nacional de Recursos Humanos de las células madre neurales en el Hospital de Niños del Condado de Orange el Instituto de Investigación para proporcionar hNSPCs y la instrucción inicial en su cultivo.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
| DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
| FGF, human basic recombinant | Reagent | Peprotech | 100-18B | |
| PDGF-AB | Reagent | Peprotech | 100-00AB | |
| EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm | ||
| Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
Referências
- Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).
- Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture. Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).
- Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. Cell culture. Progenitor cells from human brain after death. Nature. 411, 42-43 (2001).
- Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O’Dowd, D. K., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
