İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması
Summary
, In vitro olarak insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) manipüle etme yeteneği, tedavi amaçlı hücre nakli olarak kendi programını araştırmak için insan sinir gelişimi ve keşfetmek için sağlar. Bu protokol, insan kök hücre araştırmalarının giderek tekrarlanabilirlik umuduyla kültür ve Pasajlanması hNSPCs bir yöntem sunmaktadır.
Abstract
In vitro insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) manipüle etme yeteneği, tedavi amaçlı hücre nakli olarak kendi programını araştırmak için yanı sıra birçok temel insan sinir gelişimi ve patoloji süreçleri keşfetmek için bir araç sağlar. Bu protokol, bu tekniğin standartlaştırılması ve insan kök hücre araştırmalarının tekrarlanabilirlik artan umutlar, kültür ve Pasajlanması hNSPCs basit bir yöntem sunuyor. Kullandığımız hNSPCs Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynağı kadavra postnatal beyin korteks izole ve şişeler yapışık kültürler fibronektin (Palmer ve ark, 2001; Schwartz ve ark, 2003) ile kaplı olarak yetiştirilir. Biz bir DMEM kültür bizim hNSPCs: F12 serum ücretsiz medya EGF, FGF ve PDGF ile desteklenmiş ve geçit onları 01:02 yaklaşık her yedi gün. Kültür hücrelerin çoğunluğunu kullanarak, bu koşulları, iki kutuplu bir morfoloji korumak ve farklılaşmamış nöral kök hücreler (örneğin nestin ve sox2) belirteçleri ifade.
Protocol
Discussion
Biz bu protokolü hNSPCs güvenilir kültürleri sağlar bulduk. Bir kritik bir faktör hücreler için oldukça yoğun kültür olarak tutulacak ve hücrelerin seyrek olduğu noktaya geçişli olamaz ihtiyaç vardır. Bizim ellerde, seyrek kültürleri çok yavaş büyür ya da tamamen bölen ateşkes. Bu nedenle, bir kültürün son derece yoğun olduğu için, genellikle kültürler 1:2 veya 01:03 bölünmüş. Iyi hücre eki ve göç teşvik eden, ancak, laminin aksine, aynı zamanda hücreleri ayırmak için Hücre Ayrılma Tampon (CDB…
Acknowledgements
Yazarlar, minnetle, Çocuk Hastanesi, kendi kültür hNSPCs ve ilk öğretim sağlamak için Orange County Araştırma Enstitüsü Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynağı Dr. Philip H. Schwartz kabul etmiş sayılırsınız.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
| DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
| FGF, human basic recombinant | Reagent | Peprotech | 100-18B | |
| PDGF-AB | Reagent | Peprotech | 100-00AB | |
| EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm | ||
| Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
Referências
- Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).
- Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture. Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).
- Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. Cell culture. Progenitor cells from human brain after death. Nature. 411, 42-43 (2001).
- Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O’Dowd, D. K., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
