웨스턴 Invitrogen NuPage Novex BIS 트리스 MiniGels를 사용하여 모래 바닥

Summary

이 기술 문서는 Invitrogen에서 상용 NuPAGE 전기 영동 미니 젤 시스템을 사용하여 표준 서양 모래 바닥 절차를 설명합니다.

Abstract

서양은 모래 바닥 (또는 immunoblotting하는) 조사관은 단백질의 표현을 확인할 수 있도록 표준 실험실 절차, 다른 샘플에서 단백질 현재의 상대적 양을 결정하고, 공동 immunoprecipitation 실험의 결과를 분석할 수 있습니다. 이 방법에서는 대상 단백질은 조직 homogenate 또는 추출물의 주어진 샘플의 특정 기본 항체와 함께 발견됩니다. 분자량에 따른 단백질 분리는 SDS – PAGE를 denaturing 사용하여 이루어진다. 멤브레인로 전송 후, 대상 단백질은 특정 기본 항체와 탐지하고 chemiluminescence에 의해 감지.

최초의 설명 이후 서양 모래 바닥 기법 사전 주조 젤류 및 사용자 친화적인 장비를 포함한 여러 개선을 거쳐있다. 저희 연구실에서는, 우리는 Invitrogen에서 상용 NuPAGE 전기 영동 시스템을 사용하도록 선택했습니다. 그것은 혁신적인 중립 산도, 불연속 SDS – PAGE, 사전 캐스트 미니 젤 시스템입니다. 8개월에서 일년에 이르기까지 사전 주조 젤의 긴 선반 인생); II) 1에서 400 KDA하는 분자 무게의 광범위한 분리 범위는 유형에 따라이 시스템을 포함한 전통적인 Laemmli 기술을 통해 몇 가지 장점을 소개 의 겔 사용되는;) 및 III보다 다재 다능한 (아크릴 아미드 비율, 젤의 종류 및 실행 버퍼의 이온 조성의 범위).

이 비디오 문서에서 설명하는 절차는 4-12% 비스 – 트리스 기울기 젤류 및 MES는 Invitrogen의 NuPAGE 전기 영동 시스템을 사용하여 서양 얼룩을 수행하는 방법에 대한 그림으로, 버퍼를 실행하는 BIS – 트리스 불연속 버퍼 시스템을 사용합니다. 저희 연구실에서는, 우리는이 서양 모래 바닥 방법을 사용하여 다양한 생화 학적 응용 프로그램을위한 좋은 재현성 결과를 획득했습니다.

Protocol

겔 전기 영동 기술 참고 : 절차를 시작하기 전에 단백질 샘플을 준비했습니다. 이 첫 번째 단계 동안 샘플에서 단백질은 denaturing polyacrylamide 젤 전기 영동 (PAGE)를 사용하여 분자량에 따라 구분됩니다. 단백질 샘플이 10 분 동안 70 ° C에서 가열되고 나면 리튬 Dodecyl의 황산 (LDS)를 읽어 NuPAGE ® LDS 샘플 버퍼 변성 상태 poly…

Discussion

여기에 제시 절차는 MES는 Invitrogen NuPAGE Novex 전기 영동 시스템을 사용하여 페이지를 denaturing의 예로 버퍼를 실행하는 비스 – 트리스 젤을 사용합니다. 또한이 사전 캐스트 겔 시스템은 denaturing 또는 비 – denaturing 조건뿐만 아니라 아래의 단백질 분리 수 있습니다 분자 무게의 광범위한 (위한 36-400 KDA에 BIS – 트리스 젤에 대한 1-200 KDA에서 트리스 – 숙박 아세테이트 젤). 실험에 따라, 당신은 여기에서 설명한 서양 모?…