Bakterielle Immobilisierung für Imaging von Atomic Force Microscopy
Summary
Live-Gram-negative und gram-positive Bakterien können auf Gelatine-beschichteten Glimmer immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit mit Atomic Force Microscopy (AFM).
Abstract
AFM ist ein hochauflösender (nm-Skala) Imaging-Tool, das mechanisch tastet eine Oberfläche. Es hat die Fähigkeit, Bilder von Zellen und Biomolekülen, in einer flüssigen Umgebung, ohne die Notwendigkeit, chemisch behandeln die Probe. Um dieses Ziel zu erreichen, muss die Probe ausreichend, um die Montagefläche haften, um die Entfernung von Kräften von der Scan-AFM Cantileverspitze ausgeübt zu verhindern. In vielen Fällen hängt die erfolgreiche Bildgebung bei der Immobilisierung der Probe auf der Montagefläche. Optimalerweise sollten Immobilisierung werden minimal-invasive, um die Probe, so dass Stoffwechselvorgänge und funktionalen Eigenschaften nicht beeinträchtigt werden. Durch die Beschichtung frisch gespaltenem Glimmer Oberflächen mit Schweinen (Schweine-) Gelatine, können negativ geladene Bakterien auf der Oberfläche immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit, die durch AFM. Immobilisierung von Bakterienzellen auf Gelatine-beschichteten Glimmer ist sehr wahrscheinlich aufgrund von elektrostatischen Wechselwirkungen zwischen der negativ geladenen Bakterien und den positiv geladenen Gelatine. Mehrere Faktoren können mit bakteriellen Immobilisierung, einschließlich der chemischen Bestandteile der Flüssigkeit, in der die Bakterien ausgesetzt, die Inkubationszeit der Bakterien auf die Gelatine beschichtete Glimmer, Oberflächeneigenschaften des Bakterienstammes und dem Medium, in dem die Bakterien sind abgebildet stören. Insgesamt ist die Verwendung von Gelatine-beschichtete Glimmer gefunden allgemein anwendbar zu sein für die Bildgebung mikrobieller Zellen.
Protocol
Discussion
Verschiedene Faktoren können die mikrobielle Zelle Montage-und Imaging von AFM. Die Gelatine, die zur Beschichtung eingesetzt wird der Glimmer ist wichtig. Gewerbliche Gelatine wird aus einer Reihe von Wirbeltieren einschließlich Fischen, Kühen und Schweinen isoliert. Sowohl die Herkunft und das Verarbeitungsverfahren bestimmen die Gelatine die Eignung für die bakterielle Immobilisierung. Zahlreiche Quellen und Arten von Gelatine wurden auf ihre Wirksamkeit in Immobilisierung Bakterien untersucht [1]. Die beiden eff…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Forschung wird vom Amt für Biologische und Umweltforschung, US Department of Energy und durch Zuschüsse aus Virginia Commonwealth Health Research Board gesponsert. Oak Ridge National Laboratory wird von UT-Battelle, LLC, für den US-Department of Energy unter Vertrag Nr. DE-AC05-00OR22725 verwaltet.
Materials
| Name | Company | Catalogue number |
| Gelatin | Sigma, St. Louis, MO | G6144, G2625 or G2500 |
| PicoPlus Atomic Force Microscope | Agilent Technologies, Tempe, AZ | |
| AFM cantilevers | Veeco, Santa Barbara, CA | MLCT-AUHW |
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